В дополнение к традиционным методам анализа фосфорилирования белков (мечение радиоктивной "горячей" АТФ
[1], фосфо-специфичными антитиелами
[2] или замер истощения АТФ
[3]) мы здесь обобщили последние
тихники, использующие нерадиоактивно модифицированные АТФ аналоги, чей модифицированный гамма-фосфат может быть перемещен киназой ее пептидному/белковому субстрату in vitro.
Прямое мечение флуоресцентно меченой АТФ: Freeman
et al.[4] Выполнение квантовых точек (QD) как оптических метод для FRET-анализа модельной системы казеин-киназы (CK2) / щелочной фосфатазы (ALP) (Рисунок1).
ATTO590-меченая АТФ служит как донор фосфата для фосфорилирования субстратного пептида CK2
Непрямое мечение функционализированным аналогом АТФ: Lee
et al.[5] Подготовка
азид и алкин γ-модифицированных АТФ аналогов и тестирование их способности фосфорилировать p27
kip1 с диким типом протеин-киназы cdk2. Фосфорилированный белок затем метится в клик-реакции, например, с флуоресцентными красителями (Рисунок 2):
Allen et al.[6] описали катализируемое киназами тиофосфорилирование с ATPγS. Получившиеся меченые субстраты были распознаноы новыми тиофосфат-эфир-специфичными антителами.
[1] Lehel et al. (1997) A chemiluminescent microtiter plate assay for sensitive detection of protein kinase activity. Anal. Biochem. 244:340.
[2] Till et al. (1994) Use of synthetic peptide libraries and phosphopeptide-selective mass spectrometry to probe protein kinase substrate specificity. J. Biol. Chem. 269:7423.
[3] Kupcho et al. (2003) A homogeneous, nonradioactive high-throughput fluorogenic protein kinase assay. Anal. Biochem. 317:210.
[4] Freeman et al. (2010) Probing protein kinase (CK2) and alkaline phosphatase with CdSe/ZnS quantum dots. Nano Lett. 10:2192.
[5] Lee et al. (2009) Synthesis and reactivity of novel γ-phosphate modified ATP analogues. Bioorg. Med. Chem. Lett. 19:3804.
[6] Allen et al. (2007) A semisynthetic epitope for kinase substrates. Nature Methods 4 (6):511.
|
|
| Название | Код | Цена |
Количество |
| 1 mg pack |
CLK-T12-1 |
по запросу |
1 mg |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| Название | Код | Цена |
Количество |
| 1 mg pack |
CLK-T11-1 |
по запросу |
1 mg |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| Название | Код | Цена |
Количество |
| L pack |
NU-1701L |
по запросу |
5 x 100 units |
|
|
|
| S pack |
NU-1701S |
по запросу |
100 Units |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| Название | Код | Цена |
Количество |
| |
NU-833-590 |
по запросу |
30 µl
(1 mM) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| Название | Код | Цена |
Количество |
| ATPγS, 25 mg pack |
NU-406-25 |
по запросу |
25 mg |
|
|
|
| ATPγS, 5 mg pack |
NU-406-5 |
по запросу |
5 mg |
|
|
|
| ATPγS, 50 mg pack |
NU-406-50 |
по запросу |
50 mg |
|
|
|
|
|
|
|
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
Datasheet
