1. Каталог >
  2. Реактивы >
  3. Виды реактивов >
  4. Нуклеозиды, Нуклеотиды и их аналоги >
  5. Нуклеотиды >
  6. Нуклеотиды по применению >
  7. Клеточная биология >

Клеточный цикл и пролиферация

Nucleotides by Application  /  ... in Cell Biology - Cell Cycle & Proliferation

Пролиферация клеток характеризуется de novo синтезом ДНК в течение S-фазы клеточного цикла в соответствии с увеличением транскрипционной активности, сопровождаемой de novo синтезом РНК.

Обычный подход к мониторингу общего синтеза ДНК и РНК основан на включении аналога 5-меченого (деокси) уридина вместо его структурного аналога (в РНК - урацила, в ДНК тимидина) в синтезируемую ДНК или РНК цепь клеточной ДНК или РНК полимеразой соответственно. Нефосфорилированный меченый (деокси)уридин (5-X-(d)U) является клеточно-проницаемым и потому пригоден для in vivo мечения (в живых клетках)[1-5]. Напротив, меченые (деокси)уридин трифосфаты (5-X-(d)UTP) не являются клеточно-проницаемыми и могут быть использованы для in vitro анализа синтеза ДНК/РНК (в бесклеточных экстрактах)[6,7], или необходимо доставлять их в клетки для in vivo исследований, например, в липосомах (липофекция) или микроинъекциями[8].

Традиционные подходы основаны на включении Бромин-меченых (деокси)уридинов (5-Br(d)U) или (деокси)уридин-трифосфатов (5-Br(d)UTP), которые затем детектируются специфическими антителами BrdU (Таб. 1). Однако, существуют жесткие процедуры обеспечения проницаемости, необходимые для достижения достаточной эффективности окрашивания, необходимые вследствие высокой молекулярной массы антител (около 150.000 kDa), что ограничивает уровень диффузии антител в клетку.

Внедрение этинил-меченого (деокси) уридина (5-E(d)U) обеспечивает новую альтернативу мониторингу синтеза ДНК и РНК in vivo. Детекция 5-E(d)U достигается ковалетной конъюгацией с азид-содержащим флуорофором в Cu(I) катализируемой алкин-азид клик-реакции (CuAAC) (Таб. 1), которые легко вводить в клетки в мягких условиях проницаемости вследствие их значительно меньшего размера (<1000 kDa).


Таблица 1: Выбор нуклеотидов для мониторинга общего ДНК и РНК синтеза.


Измерение de novo... Проникающие в клетку нуклеотиды Не проникающие в клетку нуклеотиды Детекция
...ДНК синтеза 5-BrdU[1] 5-BrdUTP[2] BrdU специфические антитела
5-EdU[3,4]
Азиды флуоресцентных красителей
...РНК синтеза 5-BrU[5] 5-BrUTP[6,7] BrdU специфические антитела
5-EU[8]
Азиды флуоресцентных красителей

Также доступны другие алкин-модифицированные аналоги уридина - такие, как 5-EdUTP или EUTP

Литература:

[1] Vogel et al. (1986) Detection of bromodeoxyuridine-incorporation in mammalian chromosomes by a bromodeoxyuridine-antibody. Human Genetics 72(2):129.
[2] Salic et al. (2008) A chemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:2415.
[3] Li et al. (2010) Fluorogenic "click" reaction for labeling and detection of DNA in proliferating cells. Biotechniques 49(1):525.
[4] Halicka et al. (2010) Segregation of RNA and separate packaging of DNA and RNA in apoptotic bodies during apoptosis. Exp. Cell Res. 269:248.
[5] Jao et al. (2008) Exploring RNA transcription and turnover in vivo by using click chemistry. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105(41):15779.
[6] Pasero et al. (1999) In vitro DNA replication in yeast nuclear extracts. Methods 18(3):368.
[7] Javed et al. (2004) In situ immunofluorescence analysis analyzing RNA synthesis by 5-Bromouridine-5’-Triphosphate labeling. Methods in Molecular Biology 285(1):29.
[8] Haukenes et al. (1997) Labeling of RNA transcripts of eukaryotic cells in culture with BrUTP using a liposome transfection reagent (DOTAP). Biotechniques 22:308.

1 Unit = 1 µl of a 10 mM раствора.



Datasheet
НазваниеКодЦена Количество
5 g pack N-DN-1136-5G по запросу 5 g



Datasheet
НазваниеКодЦена Количество
L pack NU-122L по запросу 5 x 50 Units
S pack NU-122S по запросу 50 Units



Datasheet
НазваниеКодЦена Количество
1 g pack N-RP-1192-1G по запросу 1 g



Datasheet
НазваниеКодЦена Количество
L pack NU-121L по запросу 5 x 50 Units
S pack NU-121S по запросу 50 Units



Datasheet
НазваниеКодЦена Количество
100 mg pack CLK-N001-100 по запросу 100 mg
25 mg pack CLK-N001-25 по запросу 25 mg
5 g pack CLK-N001-5000 по запросу 5 g
500 mg pack CLK-N001-500 по запросу 500 mg



Datasheet
НазваниеКодЦена Количество
5-Ethynyl-dUTP (5-EdUTP) CLK-T07-XL по запросу 50 μl (100 mM)
L pack CLK-T07-L по запросу 5 µmol
S pack CLK-T07-S по запросу 0,5 µmol



Datasheet
НазваниеКодЦена Количество
10 mg pack CLK-N002-10 по запросу 10 mg



Datasheet
НазваниеКодЦена Количество
5-Ethynyl-UTP (5-EUTP) CLK-T08-XL по запросу 50 μl (100 mM)
L pack CLK-T08-L по запросу 5 µmol
S pack CLK-T08-S по запросу 0,5 µmol




Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой