Остаточно-селективный мониторинг синтеза белка

Динамика глобального синтеза белка (как пространственная, так и временная) - существенный параметр, характеризующий клеточный ответ при различных физиологических и патологических условиях. Белковый синтез традиционно определяется метаболическим мечением ³⁵S-метионином, который конкурирует с естественным метионином при включении в новосинтезированные белки. Детекция сводится к радиоавтографии.

Клеточно-проницаемый аналог метионина 4-Азидо-L-гомоаланин (L-AHA) и Гомопропаргилглицин (HPG) обеспечивают нерадиоактивную альтернативу для анализа глобального белкового синтеза в клеточных культурах. Они случайным образом встраиваются вместо метионина в процессе трансляции, давая в итоге полные, соответственно, азид-меченые или алкин-модифицированные белки^[1,2,3](Fig. 1)

Figure 1 Аналоги метианина применимы для включения азидных групп (L-AHA) или алкиновых групп (L-HPG) в синтезируемый белок.

Визуализация встраиваемых азидных групп (L-AHA-мечение) основано на Cu(I)-катализируемой Клик-реакции с Алкинами флуоресцентных красителей или Алкинами биотина или через не использующую медь Клик-реакцию сDBCO-содержащими флуоресцентными красителями или DBCO-содержащими Биотинами. Визуализация Алкиновых групп (HPG-мечение) может производиться только в Cu(I)-катализируемых Клик-реакциях.

Также вам могут быть интересны Азид-модифицированные аминокислоты

Белки