Другие дидеоксинуклеотиды Nucleotides by Structure / Important Structure Motifs / Unmodified and Modified ddNTPs - Other Dideoxynucleotides
|
 |
Однонуклеотидные полиморфизмы (SNPs) - мутации одной пары оснований в конкретном расположении в кодирующем или некодирующем районе генома, которые имеются более чем у 1% популяции. [1]. В то время как SNP, располагающиеся в кодирующем районе могут изменять биологическую функцию белка, SNP присутствующие в некодирующем регионе могут служить для генной регуляции. И кодирующие и некодирующие SNP связаны с популяционно-специфическим развитием заболеваний и восприимчивостью к лекарствам и и потому используются как маркеры в генетике заблоеваний и фармакогенетических исследованиях[2].
Эффективным и надежным подходом к генотипированию SNP с известным расположением является метод добавление динуклеотида(SBE - single basepair extension )[3,4,5]. Этот метод основан на удлинении праймера, способного связываться на один нуклеотид выше полиморфного локуса, SNP-комплементарным флуоресцентно меченым ddNTP[5]. Последующая детекция встроенного ddNTP обеспечивается флуоресцентной визуализацией увеличенного праймера в электрофорезе или в планшетах, выявляя таким образом нуклеотидное основания в заданной позиции на исследуемой матрице.
Наши флуоресцентно меченые ddNTP имеют очистку >95% (HPLC) и успешно используются в SBE экспериментах [5]. Помимо флуоресцентно меченых ddATP, ddCTP, ddGTP и ddUTP аналогов (например, Cy3 или Cy5-меченых), в нашем каталоге доступны амин-меченые динуклеотиды для последующего связывания с NHS-эфир-модифицированными флуоресцентными красителями и биотин-меченые динуклеотиды для детекции флуоресцентным стрептавидином
Figure 1: Детекция однонуклеотидного полиморфизма (SNP) ферментативной элонгацией праймера SNP-комплементарным флуоресцентно меченым динуклеотидом. Праймер подобран, чтобы связываться одним нуклеотидом выше полиморфного сайта. Последующая флуоресцентная визуализация продукта показывает встроенный нуклеотид и, следовательно, SNP генотип.
[1] Brookes et al. (1999) The essence of SNPs. Gene 234:177.
[2] Kim et al. (2007) SNP genotyping: technologies and biomedical applications. Annual review of Biomedical Engineering 9:289.
[3] Desphande et al. (2005) Multiplexed SNP Genotyping using single-base extension (SBE) and microsphere arrays. Current protocols in Cytometry 13 (4):1.
[4] Syvänen et al. (1999) From gels to chips: Minisequencing primer extension for analysis of point mutations and single nucleotide polymorphisms. Hum. Mut. 13:10.
[5] Esteves et al. (2011) Clinical relevance of multiple single-nucleotide polymorphisms in Pneumocystis jirovecii Pneumonia: development of a multiplex PCR-single-base-extension methodology. J. Clin. Microbiol. 49 (5):1810.
| |||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||
Datasheet
| |||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
