Unmodified ddNTP bundles for Sequencing & SNP Genotyping

Дидеоксинуклеотид трифосфаты (ddNTP) не имеют 3'-ОР uheggs dNTP, что существенно для осуществляемого полимеразой удлинения цепи в ПЦР. Поэтому ddNTP используются в сочетании с модифицированной Taq полимеразой (например Сиквенсовой полимеразой JBS или Термосиквеназой™) как 3'-концевые терминаторы цепи в секвенировании методом Сэнгера ^[1] (Fig. 1) и генотипировании однонуклеотидного полиморфизма (SNP) методом добавления динуклеотида (SBE - single base pair extension )^[2] (Fig. 2). Наши ddNTPs имеют очистку > 98 % (HPLC) и функционально тестированы в секвенировании методом обрыва цепи.

Figure 1: Секвенирование методом обрыва цепи (по Сэнгеру) ^[1] основано на линейной аплификации одноцепочечной матрицы ДНК с использованием 5'-флуоресцентно меченого праймера и модифицированной Taq полимеразы. Синтез комплементарной ДНК цепи начинается на спецефическом праймер-сайте и заканчивается при включении обрывающей цепь ddNTP, которая случайно включается вместо соответствующего dNTP. Используя четыре различных ddNTP в четырех различных реакционных емкостях, набор удлиненных праймеров останавливается на каждой A, C, G и Т. Когда эти фрагменты разделяются на подходящем гелевом матриксе, информация о последовартельности оказывается доступна в виде порядка полос (снизу вверх).

Вас также могут заинтересовать наши Наборы для секвенирования ДНК

Figure 2: The Анализ методом добавления динуклеотида (SBE) является надежным методом для определения a priori известных локализаций однонуклеотидных полиморфизмов (SNPs)^[2]. Он основан на удлинении праймера, связывающегося на один нуклеотид выше полиморфного локуса с помощью совпадения ddNTP. Последующая детекция встроенного ddNTP обеспечивается масс-спектрометрией выросшего праймера, тем самым выявляя нуклеотидное основание в этой позиции на матрице^[3].

ДНК