Лиофилизат для обратной транскрипции Лиофилизованный мастер-микс для обратной транскрипции, расфасованный
|
 |
Хранить при температуре не более 25°C
Хранить в сухом месте, либо в пакете с алюминиевым барьерным слоем
Лиофилизат может гидратироваться при уровне влажности >70% при нарушенной герметичности уплотнений
Лиофилизат содержит генетически модифицированную версию обратной транскриптазы M-MLV (MMLV-RT) с устраненной активностью РНКазы H и увеличенной термостабильностью. Фермент представляет собой РНК-зависимую ДНК-полимеразу, которая синтезирует комплементарную ДНК цепочку (кДНК), инициализированную праймером с использованием одноцепочечной РНК или ДНК в качестве матрицы. Его увеличенная термостабильность в сочетании с деактивированной активностью РНКазы H дает, по сравнению с обычной M-MLV RT, повышенную специфичность, больший выход кДНК и увеличенную эффективность для синтеза кДНК полной длины. Фермент рекомедован для синтеза кДНК длиной от 100 п.н. до 10 тыс.п.н.
Лиофилизат поставляется в стрипах реакционных пробирок или 96-луночных планшетах, загруженных готовым мастермиксом для обратной транскрипции, включая dNTP, в сухом виде, стабильном при комнатной температуре. Лиофилизат сочетает высокие характеристики, удобство использования и стабильность. Нет необходимости в заморозке, оттаивании или дозировании на льду. Всего несколько шагов дозирования минимизируют риск ошибок или контаминации. Каждая емкость содержит все компоненты (кроме праймеров и матрицы), необходимые для реакции обратной транскрипции объемом 20 μl. Для выполнения анализа просто заполните пробирки или лунки смесью праймеров и РНК-матрицы.
| Название | Код | Цена | Количество | |
| preloaded 8-tube strips | PCR-158L-8TS | по запросу | 60 strips (480 reactions) |
|
| preloaded 96-well plates |
PCR-158L-FTP | по запросу | 10 plates (960 reactions) |
|
| preloaded 96-well plates |
PCR-158L-HSP | по запросу | 10 plates (960 reactions) |
|
| preloaded 8-tube strips | PCR-158S-8TS | по запросу | 12 strips (96 reactions) |
|
| preloaded 96-well plates |
PCR-158S-FTP | по запросу | 2 plates (192 reactions) |
|
| preloaded 96-well plates |
PCR-158S-HSP | по запросу | 2 plates (192 reactions) |
| Документы |
|---|
 Datasheet
|
Состав набора:
-
Лиофилизат мастермикса для обратной транскрипции
содержит SCRIPT обратную транскриптазу, dNTP, реакционный буфер, MgCl2 и стабилизаторы - Вода для ПЦР
| Cat № | Количество | Размер |
| PCR-158S-8TS | 12 стрипов / 96 реакций | Стрипы по 8 пробирок |
| PCR-158L-8TS | 60 стрипов / 480 реакций | |
| PCR-158S-FTP | 2 планшета / 192 реакции | 96-луночные планшеты (плоский верх, без каймы) |
| PCR-158L-FTP | 10 планшетов / 960 реакций | |
| PCR-158S-HSP | 2 планшета / 192 реакции | 96-луночные планшеты (половинчатая кайма) |
| PCR-158L-HSP | 10 планшетов / 960 реакций |
Рекомендуемый протокол для синтеза кДНК
-
Подготовка смеси РНК/Праймеры
Добавьте следующие компоненты в чистую от нуклеаз пробирку и аккуратно перемешайте пипетированием.Компонент 1 анализ Матрица РНК 10 pg - 5 μg тотальной РНК или 10 pg - 500 ng мРНК Праймер ген-специфичный праймер: 10-20 ng (2-4 pmol)
oligo-dT15-25 праймер: 200-500 ng (30-75 pmol)
случайный праймер: 50-200 ng (30-120 pmol)Вода, свободная от РНКаз долить до 20 μl
-
Денатурация и отжиг праймеров (опционально)
Обратите внимание: денатурация образца особенно рекомендуется для РНК-целей, сильно подверженных образованию вторичной струкутры, для само- или кросс-комплементырных праймеров и для начальных экспериментов с новыми целями. Для многих стандартных сочетаний РНК и праймеров термообработка может быть опущена без негативных последствий для результата. Как правило, вода, РНК и праймеры должны быть смешаны перед добавлением остальных компонентов.
Инкубируйте смесь 5 минут при 70°C и поместите её в комнатную температуру на 5 минут (при использовании специфических праймеров) или на лед (если используются oligo-dT или случайные праймеры).
-
Дозирование мастер-микса
Поместите 20 μl смесь РНК/Праймеров в каждую содержащую лиофилизат пробирку или лунку планшета.
-
Инкубация
Инкубируйте реакционную смесь при 50°C в течение 30-60 минут.
Обратите внимание: Оптимальное время зависит от длины кДНК. Инкубация в течение 60 минут рекомендована для фрагментов кДНК более 2000 п.н. Оптимальная температура зависит от структурных особенностей РНК. Для сложных матриц с выраженной вторичной структурой увеличьте температуру до 55°C. Оптимальное время реакции и температура должны подбираться для каждой конкретной РНК.
-
Инактивация
Нагревайте смесь до 75°C в течение 15 минут для инактивации обратной транскриптазы.
-
Удаление РНК (если требуется)
кДНК может быть теперь использована как матрица для амплификации в ПЦР. Однако, некоторые особые виды амплификации могу требовать предварительного удаления РНК. Добавьте 2 ед. РНКазы H и инкубируйте при 37°C в течение 20 минут.
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
