1. Каталог >
  2. Реактивы >
  3. Объекты >
  4. ДНК >
  5. Выделение ДНК из биологического материала >
  6. Очистка ДНК >

Набор очистки ПЦР-продукта

Очистка ДНК из ПЦР-образцов на спин-колонках


Хранить при комнатной температуре
Срок годности: 12 месяцев

Набор предназначен для обработке ПЦР-продукта (удаления праймер-димеров, праймеров, нуклеотидов, белков, солей, аагрозы, бромистого этидия и других примесей). Метод основан на технологии кремниевых мембран для связывания ДНК при высокой солености и элюции в буфер низкой солености. Набор обеспечивает простой и эффективный путь очистки линейной или кольцевидной ДНК размером от 100 п.н. до 10 тыс.п.н.и оптимизирован для работы с количествами ДНК около 20 µg. Такой метод не требует экстракции или осаждения органическими растворителями и гарантирует высокий и стабильный уровень очистки.

Название Код Цена Количество
L pack PP-201L по запросу 250 preparations
S pack PP-201S по запросу 50 preparations
Sample PP-201XS по запросу 10 preparations


Документы
Datasheet




Дополнительно необходимо (не поставляется в комплекте):
  • 96-99% этиловый спирт
  • Изопропанол (для пробоподготовки с высоким выходом)
  • Пробирки 1,5 мл.


Состав набора:

PP-201XS
(10 реакций)
PP-201S
(50 реакций)
PP-201L
(250 реакций)
Связывающий буфер 6 ml 30 ml 150 ml
Активационный буфер 1,2 ml 6 ml 30 ml
Отмывочный буфер Добавьте 12 ml этанола (итоговый объем 15 ml) Добавьте 64 ml этанола (итоговый объем 80 ml) Добавьте 160 ml этанола (итоговый объем 200 ml)
Элюционный буфер 1 ml 5 ml 25 ml
Спин-колонки
Пробирки 2 мл.

Подготовка к работе: Очистка ДНК состоит из простых процедур связывания, отмывки и элюирования. Перед началом работы требуется разбавить отмывочный буфер 96-99% этиловым спиртом, как указано на бутыли:

Дополнительно использование изопропанола рекомендовано для фрагментов меньше 200 п.н. или больше 5 тыс.п.н. Необязательной второй шаг отмывки минимизирует содержание солей в очищенном продукте, но может значительно уменьшать выход фрагментов ДНК <200 п.н.

Очистка ДНК из ПЦР-образцов

  1. Подготовка пробы:
    1. Стандартная - для фрагментов ДНК размером от 200 п.н. до 5 тыс.п.н.:
      Добавьте 5 объемов Связывающего буфера к 1 объему образца ДНК и хорошо перемешайте. К примеру, если объем вашего ДНК образца составляет 50 µl, добавьте 250 µl Связывающего буфера.
    2. Подготовка с высоким выходом - для фрагментов ДНК размером менее 200 п.н. или более 5 тыс.п.н.:
      Добавьте 3 объема Связывающего буфера и 2 объема Изопропанола к ПЦР-образцу. К примеру, если объем вашего ДНК образца составляет 50 µl, добавьте 150 µl Связывающего буфера и 100 µl Изопропанола.
  2. Активация колонки:
    • Поместите спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов
    • Внесите 100 µl Активационного буфера в спин-колонку
    • Центрифугируйте 30 секунд при 10 000 g
  3. Загрузка колонок:
    • Поместите в активированную спин-колонку смесь из шага 1.
    • Центрифугируйте 30 секунд при 10 000 g
    • Удалите отфильтровавшуюся жидкость
  4. Отмывка колонки:
    • Поместите загруженную ДНК спин-колонку в 2 мл. пробирку.
    • Добавьте в спин-колонку 700 µl отмывочного буфера
    • Центрифугируйте 30 секунд при 10 000 g и удалите отфильтровавшуюся жидкость

    Необязательная вторичная отмывка колонки: рекомендуется только для ДНК > 200 п.н., если требуется высокоочищенная ДНК (для секвенирования, трансфекции и т.д.)
    • Добавьте в спин-колонку 700 µl отмывочного буфера
    • Центрифугируйте 30 секунд при 10 000 g и удалите отфильтровавшуюся жидкость
    • Центрифугируйте снова 2 минуты для удаления остатков отмывочного буфера
  5. Элюция:
    • Поместите спин-колонку в чистую 1,5 мл пробирку (не включена в комплект)
    • Добавьте 30-50 µl элюционного буфера или бидистиллированной воды в центр мембраны колонки
    • Выдерживайте при комнатной температуре 1 минуту
    • Центрифугируйте 1 минуты при 10 000 g для элюции ДНК

Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой