Набор для выделения ДНК из крови, животных и растительных тканей

+7(499)397-01-09 Корзина

Каталог > Реактивы > Объекты > ДНК > Выделение ДНК из биологического материала > Выделение геномной ДНК, в колонках >
Набор для выделения ДНК из крови, животных и растительных тканей Набор реагентов для получения геномной ДНК из крови, животных и растительных клеток, в колонках

Комплект реагентов PP-213 разработан для выделения тотальной ДНК из цельной крови, растительных и животных тканей. Выделяемая данным методом ДНК пригодна для различных последующих методик, включая количественную ПЦР, блоттинг по Саузерену, генотипирование и обнаружение или верификация SNP/SSR маркеров.

Способ выделения днк базируется на использовании кремниевой мембраны для связывания ДНК в центрифужных колонках. Это позволяет полностью убрать из раствора ингибиторы ПЦР - например, белки и двухвалентные катионы, получая в итоге высокоочищенный препарат геномной ДНК.

При этом способе выделения ДНК не применяется фенол или хлороформ, вследствие чего работа с набором безопасна, а также не образуется опасных отходов. Набор для выделения ДНК в колонках позволяет выход до 30 µg ДНК на выделение, длина молекул от 200 bp до 50 kb.

Название

Код

Цена

Количество

L pack

PP-213L

по запросу

250 preparations

S pack

PP-213S

по запросу

50 preparations

Sample

PP-213XS

по запросу

10 preparations

Документы
Datasheet

Дополнительно необходимо (не поставляется в наборе):

96-99% этиловый спирт
Бидистиллированная вода
Пробирки 1,5 - 2 мл.
Опционально - жидкий азот для гомогенизации тканей, содержащих механически прочные элементы

Предварительная подготовка: Перед началом необходимо разбавить некоторые реактивы бидистиллированной водой, либо 96-99% этиловым спиртом в соответствии c приведенной далее таблицей:

Комплектация

	PP-213XS (10 проб)	PP-213S (50 проб)	PP-213L (250 проб)
Буфер для лизирования крови	11 мл.	55 мл.	2х 137 мл.
Универсальный лизирующий буфер	3.2 мл.	16 мл.	80 мл.
Связывающий буфер	3.2 мл.	16 мл.	80 мл.
РНКаза A	1.5 мг (добавить 30 µl воды)	7.5 мг (добавить 150 µl воды)	5x 7.5 мг (добавить 150 µl воды к каждой пробирке)
Лизоцим	2.5 мг (добавить 25 µl воды)	12.5 мг (добавить 125 µl воды)	5x 12.5 мг (добавить 125 µl воды к каждой пробирке)
Протеиназа K	1 мг (добавить 100 µl воды)	5 мг (добавить 500 µl воды)	5x 5 мг(добавить 500 µl воды к каждой пробирке)
Буфер для активации	1.2 мл.	6 мл.	30 мл.
Отмывочный буфер	добавить 9.6 мл этанола до итогового объема 12 мл.	добавить 48 мл этанола до итогового объема 60 мл.	добавить в каждую бутыль 120 мл этанола до итогового объема 150 мл.
Элюционный буфер	1 мл.	5 мл.	25 мл.

Для получения оптимального выхода и чистоты ДНК важно использовать подходящий объем анализируемого образца. В одной колонке может быть выделена ДНК из цельной крови (человека) объемом до 200 мкл, из образца животной или растительной ткани массой до 80 мг.

Выделение ДНК из крови, животных и растительных тканей

Подготовка образца
- При выделении ДНК из крови:
  - Смешайте 200 мкл. (1 объем) цельной крови (человека) с 1 мл. (5 объемов) Буфера для лизирования крови в пробирке подходящего размера.
  - Инкубируйте в течение 10 минут на льду, за это время 2-3 раза быстро помешайте на вортексе
  - Центрифугируйте в течение 10 минут при 10 000 g чтобы осадить белые кровяные клетки
  - Полностью удалите надосадочную жидкость
- При выделении ДНК из животной или растительной ткани:
  - Выделение можно проводить из свежих или замороженных тканей массой до 80 мг. При -70°C ткани могут храниться до нескольких месяцев.
  - Для лучшей гомогенизации рекомендуется быстрая заморозка тканей добавлением жидкого азота с последующим растиранием.
  - При растирании тканей в жидком азоте пестиком в ступке переносите их в предварительно охлажденную жидким азотом пробирку 1,5 мл.
Расщепление клеток
- Внесите 300 µl универсального лизирующего буфера и 2 µl РНКазы А в клеточный осадок или гомогенат тканей
- Энергично встряхните на вортексе 30-60 сек
- Внесите 8 µl Протеиназы К и пипетируйте для перемешивания
- Выдерживайте 10 минут при 60°С и охлаждайте 5 минут
- Внесите 300 µl буфера для связывания и немного встряхните на вортексе
- Поставьте пробирку на лед на 5 минут
- Центрифугируйте 5 минут при 10 000 g
Активация колонки (при выделении из животных тканей и крови - опционально):
- Вставьте спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов
- Внесите 100 µl буфера для активации в спин-колонку
- Центрифугируйте 30 секунд при 10 000 g и немедленно следуйте к следующему этапу
- Удалите отфильтровавшуюся жидкость
Загрузка колонок:
- Вставьте спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов (если этого не было выполнено на предыдущем этапе)
- Внесите надосадочную жидкость(лизат) прямо в спин-колонку
- Центрифугируйте 1 минуту при 10 000 g
- Удалите отфильтровавшуюся жидкость
Первичная отмывка:
- Внесите 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
- Центрифугируйте 30 секунд при 10 000 g
- Удалите отфильтровавшуюся жидкость
Вторичная отмывка:
- Внесите 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
- Центрифугируйте 30 секунд при 10 000 g
- Удалите отфильтровавшуюся жидкость
- Повторно центрифугируйте 1 минуту ( 2 минуты при выделении из растений ) при 10 000 g с целью удалить остатки отмывочного буфера
- Удалите 2 мл отмывочную пробирку и вставьте колонку в пробирку для выделения
Выделение ДНК:
- Внесите 40-50 µl элюционного буфера в центр колонки
- Выдерживайте при комнатной температуре 1 минуту
- Центрифугируйте 2 минуты при 10 000 g
- Храните ДНК при 4°С или -20°С

Выделение геномной ДНК, в колонках

Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой