Набор для выделения ДНК из крови, животных и растительных тканей Набор реагентов для получения геномной ДНК из крови, животных и растительных клеток, в колонках
|
 |
Способ выделения днк базируется на использовании кремниевой мембраны для связывания ДНК в центрифужных колонках. Это позволяет полностью убрать из раствора ингибиторы ПЦР - например, белки и двухвалентные катионы, получая в итоге высокоочищенный препарат геномной ДНК.
При этом способе выделения ДНК не применяется фенол или хлороформ, вследствие чего работа с набором безопасна, а также не образуется опасных отходов. Набор для выделения ДНК в колонках позволяет выход до 30 µg ДНК на выделение, длина молекул от 200 bp до 50 kb.
| Название | Код | Цена | Количество | |
| L pack | PP-213L | по запросу | 250 preparations | |
| S pack | PP-213S | по запросу | 50 preparations | |
| Sample | PP-213XS | по запросу | 10 preparations |
| Документы |
|---|
 Datasheet
|
Дополнительно необходимо (не поставляется в наборе):
- 96-99% этиловый спирт
- Бидистиллированная вода
- Пробирки 1,5 - 2 мл.
- Опционально - жидкий азот для гомогенизации тканей, содержащих механически прочные элементы
Предварительная подготовка: Перед началом необходимо разбавить некоторые реактивы бидистиллированной водой, либо 96-99% этиловым спиртом в соответствии c приведенной далее таблицей:
Комплектация
| PP-213XS (10 проб) |
PP-213S (50 проб) |
PP-213L (250 проб) |
|
| Буфер для лизирования крови | 11 мл. | 55 мл. | 2х 137 мл. |
| Универсальный лизирующий буфер | 3.2 мл. | 16 мл. | 80 мл. |
| Связывающий буфер | 3.2 мл. | 16 мл. | 80 мл. |
| РНКаза A | 1.5 мг (добавить 30 µl воды) | 7.5 мг (добавить 150 µl воды) | 5x 7.5 мг (добавить 150 µl воды к каждой пробирке) |
| Лизоцим | 2.5 мг (добавить 25 µl воды) | 12.5 мг (добавить 125 µl воды) | 5x 12.5 мг (добавить 125 µl воды к каждой пробирке) |
| Протеиназа K | 1 мг (добавить 100 µl воды) | 5 мг (добавить 500 µl воды) | 5x 5 мг(добавить 500 µl воды к каждой пробирке) |
| Буфер для активации | 1.2 мл. | 6 мл. | 30 мл. |
| Отмывочный буфер | добавить 9.6 мл этанола до итогового объема 12 мл. | добавить 48 мл этанола до итогового объема 60 мл. | добавить в каждую бутыль 120 мл этанола до итогового объема 150 мл. |
| Элюционный буфер | 1 мл. | 5 мл. | 25 мл. |
Для получения оптимального выхода и чистоты ДНК важно использовать подходящий объем анализируемого образца. В одной колонке может быть выделена ДНК из цельной крови (человека) объемом до 200 мкл, из образца животной или растительной ткани массой до 80 мг.
Выделение ДНК из крови, животных и растительных тканей
-
Подготовка образца
- При выделении ДНК из крови:
- Смешайте 200 мкл. (1 объем) цельной крови (человека) с 1 мл. (5 объемов) Буфера для лизирования крови в пробирке подходящего размера.
- Инкубируйте в течение 10 минут на льду, за это время 2-3 раза быстро помешайте на вортексе
- Центрифугируйте в течение 10 минут при 10 000 g чтобы осадить белые кровяные клетки
- Полностью удалите надосадочную жидкость
- При выделении ДНК из животной или растительной ткани:
- Выделение можно проводить из свежих или замороженных тканей массой до 80 мг. При -70°C ткани могут храниться до нескольких месяцев.
- Для лучшей гомогенизации рекомендуется быстрая заморозка тканей добавлением жидкого азота с последующим растиранием.
- При растирании тканей в жидком азоте пестиком в ступке переносите их в предварительно охлажденную жидким азотом пробирку 1,5 мл.
- При выделении ДНК из крови:
-
Расщепление клеток
- Внесите 300 µl универсального лизирующего буфера и 2 µl РНКазы А в клеточный осадок или гомогенат тканей
- Энергично встряхните на вортексе 30-60 сек
- Внесите 8 µl Протеиназы К и пипетируйте для перемешивания
- Выдерживайте 10 минут при 60°С и охлаждайте 5 минут
- Внесите 300 µl буфера для связывания и немного встряхните на вортексе
- Поставьте пробирку на лед на 5 минут
- Центрифугируйте 5 минут при 10 000 g
-
Активация колонки (при выделении из животных тканей и крови - опционально):
- Вставьте спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов
- Внесите 100 µl буфера для активации в спин-колонку
- Центрифугируйте 30 секунд при 10 000 g и немедленно следуйте к следующему этапу
- Удалите отфильтровавшуюся жидкость
-
Загрузка колонок:
- Вставьте спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов (если этого не было выполнено на предыдущем этапе)
- Внесите надосадочную жидкость(лизат) прямо в спин-колонку
- Центрифугируйте 1 минуту при 10 000 g
- Удалите отфильтровавшуюся жидкость
-
Первичная отмывка:
- Внесите 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
- Центрифугируйте 30 секунд при 10 000 g
- Удалите отфильтровавшуюся жидкость
-
Вторичная отмывка:
- Внесите 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
- Центрифугируйте 30 секунд при 10 000 g
- Удалите отфильтровавшуюся жидкость
- Повторно центрифугируйте 1 минуту ( 2 минуты при выделении из растений ) при 10 000 g с целью удалить остатки отмывочного буфера
- Удалите 2 мл отмывочную пробирку и вставьте колонку в пробирку для выделения
-
Выделение ДНК:
- Внесите 40-50 µl элюционного буфера в центр колонки
- Выдерживайте при комнатной температуре 1 минуту
- Центрифугируйте 2 минуты при 10 000 g
- Храните ДНК при 4°С или -20°С
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
