Набор для выделения ДНК из бактерий Набор реактивов для получения геномной ДНК из бактерий, в колонках
|
 |
Метод выделения основан на адсорбции ДНК на силикагелевой мембране в центрифужных колонках. Это позволяет полностью удалить ингибиторы ПЦР - такие, как бивалентные катионы и белки, получая в результате геномную ДНК высокой степени очистки.
В данном методе выделения ДНК не используется фенол или хлороформ, благодаря чему обращение с набором безопасно, а также не образуется вредных отходов. Набор для выделения ДНК в колонках позволяет получать выход до 30 µg ДНК на выделение, размер молекул от 200 bp до 50 kb.
| Название | Код | Цена | Количество | |
| L pack | PP-214L | по запросу | 250 preparations | |
| S pack | PP-214S | по запросу | 50 preparations | |
| Sample | PP-214XS | по запросу | 10 preparations |
| Документы |
|---|
 Datasheet
|
Дополнительно понадобится (не входит в комплект):
- 96-99% этанол
- Бидистиллированная вода
- Пробирки 1,5 - 2 мл.
Предварительные процедуры: Перед началом необходимо разбавить некоторые реактивы бидистиллированной водой, либо 96-99% этанолом согласно приведенной ниже таблице.
Состав набора
| PP-214XS (10 проб) |
PP-214S (50 проб) |
PP-214L (250 проб) |
|
| Буфер для ресуспендирования | 3.2 мл. | 16 мл. | 80 мл. |
| Буфер для лизиса | 3.2 мл. | 16 мл. | 80 мл. |
| Буфер для связывания | 3.2 мл. | 16 мл. | 80 мл. |
| РНКаза A | 1.5 мг (добавить 30 µl воды) | 7.5 мг (добавить 150 µl воды) | 5x 7.5 мг (добавить 150 µl воды к каждой пробирке) |
| Лизоцим | 2.5 мг (добавить 25 µl воды) | 12.5 мг (добавить 125 µl воды) | 5x 12.5 мг (добавить 125 µl воды к каждой пробирке) |
| Протеиназа K | 1 мг (добавить 100 µl воды) | 5 мг (добавить 500 µl воды) | 5x 5 мг (добавить 500 µl воды к каждой пробирке) |
| Буфер для активации | 1.2 мл. | 6 мл. | 30 мл. |
| Отмывочный буфер | добавить 9.6 мл этанола до итогового объема 12 мл. | добавить 48 мл этанола до итогового объема 60 мл. | добавить в каждую бутыль 120 мл этанола до итогового объема 150 мл. |
| Элюционный буфер | 1 мл. | 5 мл. | 25 мл. |
| Прочее | Спин-колонки, Коллекторные пробирки 2 мл. |
||
Важно использовать правильное количество исходного материала для того, чтобы получить оптимальный выход и степень очистки ДНК. В одной пробе может быть обработано до 108 бактериальных клеток. Клеточный осадок может храниться при температуре -70°C в течение нескольких месяцев.
Выделение ДНК из бактерий (грам-положительных и грам-отрицательных)
-
Клеточное ресуспендирование
- Соберите 500 мкл культивируемых клеток бактерий центрифугированием при 10 000хg в течение 1 минуты
- Удалите надосадочную жидкость
- При выделении ДНК из грам-положительных бактерий:
- Ресуспендируйте клеточную массу в 300 мкл буфера для ресуспендирования
- Добавьте 2 µl раствора Лизоцима
- Хорошо перемешайте, переворачивая пробирку несколько раз
- Инкубируйте в течение 1 минуты при 37°С
- Центрифугируйте в течение 1 минуты при 10 000хg
- Удалите надосадочную жидкость
-
Клеточный лизис
- Добавьте 300 µl буфера для лизиса и 2 µl РНКазы А в клеточную массу
- Энергично перемешайте на вортексе в течение 30-60 сек
- Добавьте 8 µl Протеиназы К и перемешайте пипетированием
- Инкубируйте в течение 10 минут при 60°С и остужайте в течение 5 минут
- Добавьте 300 µl буфера для связывания и немного перемешайте на вортексе
- Поместите пробирку на лед на 5 минут
- Центрифугируйте в течение 5 минут при 10 000 g
-
Активация колонки (опционально):
- Поместите спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов
- Добавьте 100 µl буфера для активации в спин-колонку
- Центрифугируйте в течение 30 сек при 10 000 g и сразу же переходите к следующему шагу
- Удалите фильтрат
-
Загрузка колонок:
- Поместите спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов (если этого не было сделано ранее)
- Накапайте надосадочную жидкость прямо в спин-колонку
- Центрифугируйте в течение 1 минуты при 10 000 g
- Удалите фильтрат
-
Первичная отмывка:
- Добавьте 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
- Центрифугируйте в течение 30 секунд при 10 000 g
- Удалите фильтрат
-
Вторичная отмывка:
- Добавьте 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
- Центрифугируйте в течение 30 секунд при 10 000 g
- Удалите фильтрат
- Еще раз центрифугируйте в течение 1 минуты при 10 000 g, чтобы удалить остатки отмывочного буфера
- Удалите 2 мл отмывочную пробирку и поместите колонку в пробирку для выделения
-
Выделение ДНК:
- Добавьте 40-50 µl элюционного буфера в центр колонки
- Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты
- Центрифугируйте в течение 2 минут при 10 000 g
- Храните ДНК при 4°С или -20°С
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
