1. Каталог >
  2. Реактивы >
  3. Объекты >
  4. ДНК >
  5. Выделение ДНК из биологического материала >
  6. Выделение геномной ДНК, в колонках >

Набор для выделения ДНК из бактерий

Набор реактивов для получения геномной ДНК из бактерий, в колонках

Набор реактивов PP-214 предназначен для выделения из бактерий геномной ДНК, подходящей для различных применений, в том числе для ПЦР в реальном времени, Саузерн-блот анализ, генотипирование и открытие или проверка SNP/SSR маркеров.

Метод выделения основан на адсорбции ДНК на силикагелевой мембране в центрифужных колонках. Это позволяет полностью удалить ингибиторы ПЦР - такие, как бивалентные катионы и белки, получая в результате геномную ДНК высокой степени очистки.

В данном методе выделения ДНК не используется фенол или хлороформ, благодаря чему обращение с набором безопасно, а также не образуется вредных отходов. Набор для выделения ДНК в колонках позволяет получать выход до 30 µg ДНК на выделение, размер молекул от 200 bp до 50 kb.

Название Код Цена Количество
L pack PP-214L по запросу 250 preparations
S pack PP-214S по запросу 50 preparations
Sample PP-214XS по запросу 10 preparations


Документы
Datasheet


Дополнительно понадобится (не входит в комплект):
  • 96-99% этанол
  • Бидистиллированная вода
  • Пробирки 1,5 - 2 мл.

Предварительные процедуры: Перед началом необходимо разбавить некоторые реактивы бидистиллированной водой, либо 96-99% этанолом согласно приведенной ниже таблице.

Состав набора

PP-214XS
(10 проб)
PP-214S
(50 проб)
PP-214L
(250 проб)
Буфер для ресуспендирования 3.2 мл. 16 мл. 80 мл.
Буфер для лизиса 3.2 мл. 16 мл. 80 мл.
Буфер для связывания 3.2 мл. 16 мл. 80 мл.
РНКаза A 1.5 мг (добавить 30 µl воды) 7.5 мг (добавить 150 µl воды) 5x 7.5 мг (добавить 150 µl воды к каждой пробирке)
Лизоцим 2.5 мг (добавить 25 µl воды) 12.5 мг (добавить 125 µl воды) 5x 12.5 мг (добавить 125 µl воды к каждой пробирке)
Протеиназа K 1 мг (добавить 100 µl воды) 5 мг (добавить 500 µl воды) 5x 5 мг (добавить 500 µl воды к каждой пробирке)
Буфер для активации 1.2 мл. 6 мл. 30 мл.
Отмывочный буфер добавить 9.6 мл этанола до итогового объема 12 мл. добавить 48 мл этанола до итогового объема 60 мл. добавить в каждую бутыль 120 мл этанола до итогового объема 150 мл.
Элюционный буфер 1 мл. 5 мл. 25 мл.
Прочее
Спин-колонки, Коллекторные пробирки 2 мл.



Важно использовать правильное количество исходного материала для того, чтобы получить оптимальный выход и степень очистки ДНК. В одной пробе может быть обработано до 108 бактериальных клеток. Клеточный осадок может храниться при температуре -70°C в течение нескольких месяцев.

Выделение ДНК из бактерий (грам-положительных и грам-отрицательных)

  1. Клеточное ресуспендирование
    • Соберите 500 мкл культивируемых клеток бактерий центрифугированием при 10 000хg в течение 1 минуты
    • Удалите надосадочную жидкость
    • При выделении ДНК из грам-положительных бактерий:
      • Ресуспендируйте клеточную массу в 300 мкл буфера для ресуспендирования
      • Добавьте 2 µl раствора Лизоцима
      • Хорошо перемешайте, переворачивая пробирку несколько раз
      • Инкубируйте в течение 1 минуты при 37°С
      • Центрифугируйте в течение 1 минуты при 10 000хg
      • Удалите надосадочную жидкость
  2. Клеточный лизис
    • Добавьте 300 µl буфера для лизиса и 2 µl РНКазы А в клеточную массу
    • Энергично перемешайте на вортексе в течение 30-60 сек
    • Добавьте 8 µl Протеиназы К и перемешайте пипетированием
    • Инкубируйте в течение 10 минут при 60°С и остужайте в течение 5 минут
    • Добавьте 300 µl буфера для связывания и немного перемешайте на вортексе
    • Поместите пробирку на лед на 5 минут
    • Центрифугируйте в течение 5 минут при 10 000 g
  3. Активация колонки (опционально):
    • Поместите спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов
    • Добавьте 100 µl буфера для активации в спин-колонку
    • Центрифугируйте в течение 30 сек при 10 000 g и сразу же переходите к следующему шагу
    • Удалите фильтрат
  4. Загрузка колонок:
    • Поместите спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов (если этого не было сделано ранее)
    • Накапайте надосадочную жидкость прямо в спин-колонку
    • Центрифугируйте в течение 1 минуты при 10 000 g
    • Удалите фильтрат
  5. Первичная отмывка:
    • Добавьте 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
    • Центрифугируйте в течение 30 секунд при 10 000 g
    • Удалите фильтрат
  6. Вторичная отмывка:
    • Добавьте 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
    • Центрифугируйте в течение 30 секунд при 10 000 g
    • Удалите фильтрат
    • Еще раз центрифугируйте в течение 1 минуты при 10 000 g, чтобы удалить остатки отмывочного буфера
    • Удалите 2 мл отмывочную пробирку и поместите колонку в пробирку для выделения
  7. Выделение ДНК:
    • Добавьте 40-50 µl элюционного буфера в центр колонки
    • Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 минуты
    • Центрифугируйте в течение 2 минут при 10 000 g
    • Храните ДНК при 4°С или -20°С

Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой