1. Каталог >
  2. Реактивы >
  3. Объекты >
  4. ДНК >
  5. Выделение ДНК из биологического материала >
  6. Выделение геномной ДНК, в колонках >

Набор для выделения ДНК из дрожжей

Набор реактивов для получения геномной ДНК из дрожжей, в колонках

Набор реагентов PP-215 предназначен для выделения из дрожжевых клеток тотальной ДНК, пригодной для различных применений, включая ПЦР в реальном времени, блоттинг по Саузерену, генотипирование и открытие или верификация SNP/SSR маркеров.

Механизм выделения днк базируется на адсорбции ДНК на силикагелевой мембране в центрифужных колонках. Это позволяет полностью ликвидировать ингибиторы ПЦР - такие, как, двухвалентные катионы и белки, получая в результате геномную ДНК высокой степени очистки.

В данном методе выделения ДНК не применяется фенол или хлороформ, благодаря чему работа с набором безопасна, а также не образуется вредных отходов. Набор для выделения ДНК в колонках позволяет получать выход до 30 µg ДНК на выделение, размер молекул от 200 bp до 50 kb.

Название Код Цена Количество
L pack PP-215L по запросу 250 preparations
S pack PP-215S по запросу 50 preparations
Sample PP-215XS по запросу 10 preparations


Документы
Datasheet


Дополнительно понадобится (не поставляется в комплекте):
  • 96-99% этиловый спирт
  • Бидистиллированная вода
  • Пробирки 1,5 - 2 мл.

Предварительные процедуры: Перед началом необходимо разбавить некоторые реактивы бидистиллированной водой, 96-99% этиловым спиртом или смешать между собой согласно приведенной далее таблице:

Состав набора

PP-215XS
(10 проб)
PP-215S
(50 проб)
PP-215L
(250 проб)
Буфер для ресуспендирования 3.2 мл. 16 мл. 80 мл.
Литиказа (2.5 units/мкл)) 35 units (добавить 14 мкл буфера литиказы) 175 units (добавить 70 мкл буфера литиказы) 5 x 175 units (добавить 70 мкл буфера литиказы в каждую пробирку)
Буфер литиказы 14 мкл 70 мкл 350 мкл
Буфер для лизиса 3.2 мл. 16 мл. 80 мл.
Буфер для связывания 3.2 мл. 16 мл. 80 мл.
РНКаза A 1.5 мг (добавить 30 µl воды) 7.5 мг (добавить 150 µl воды) 5x 7.5 мг (добавить 150 µl воды к каждой пробирке)
Протеиназа K 1 мг (добавить 100 µl воды) 5 мг (добавить 500 µl воды) 5x 5 мг(добавить 500 µl воды к каждой пробирке)
Буфер для активации 1.2 мл. 6 мл. 30 мл.
Отмывочный буфер добавить 9.6 мл этанола до итогового объема 12 мл. добавить 48 мл этанола до итогового объема 60 мл. добавить в каждую бутыль 120 мл этанола до итогового объема 150 мл.
Элюционный буфер 1 мл. 5 мл. 25 мл.

Важно использовать верное количество анализируемого образца для того, чтобы получить оптимальный выход и степень очистки ДНК. В одной пробе может быть обработано до 1 - 2 x 107 дрожжевых клеток. Клеточный осадок может храниться замороженным при -70°C в течение нескольких месяцев.

Выделение ДНК из дрожжей

  1. Ресуспендирование и лизис клеток дрожжей
    • Осадите 500 мкл культивируемых дрожжевых клеток центрифугированием при 8 000 g в течение 1 минуты
    • Удалите надосадочную жидкость и немедленно приступайте к следующему шагу
    • Внесите 100 µl буфера для ресуспендирования и 1 µl Литиказы в клеточный осадок
    • Интенсивно встряхните на вортексе 10 сек
    • Выдерживайте 15 минут при 37°С
    • Центрифугируйте в течение 1 минуты при 10 000 g
    • Удалите супернатант
    • Добавьте 300 µl буфера для лизиса и 2 µl РНКазы А в клеточный осадок
    • Энергично перемешайте на вортексе 10 сек
    • Добавьте 8 µl Протеиназы К и пипетируйте для перемешивания
    • Инкубируйте 10 минут при 60°С и остужайте на льду 5 минут
    • Добавьте 300 µl буфера для связывания и немного встряхните на вортексе
    • Поместите пробирку на лед на 5 минут
    • Центрифугируйте 5 минут при 10 000 g
  2. Активация колонки (опционально):
    • Поместите спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов
    • Внесите 100 µl буфера для активации в спин-колонку
    • Центрифугируйте в течение 30 секунд при 10 000 g и сразу же следуйте к следующему пункту
    • Удалите фильтрат
  3. Загрузка колонок:
    • Вставьте спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов (если этого не было сделано на предыдущем этапе)
    • Поместите надосадочную жидкость(лизат) прямо в спин-колонку
    • Центрифугируйте 1 мин при 10 000 g
    • Удалите фильтрат
  4. Первичная отмывка:
    • Внесите 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
    • Центрифугируйте в течение 30 секунд при 10 000 g
    • Удалите фильтрат
  5. Вторичная отмывка:
    • Добавьте 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
    • Центрифугируйте 30 сек при 10 000 g
    • Удалите отфильтровавшуюся жидкость
    • Еще раз центрифугируйте 1 минуту при 10 000 g, чтобы удалить остатки отмывочного буфера
    • Удалите 2 мл отмывочную пробирку и вставьте колонку в пробирку для выделения
  6. Выделение ДНК:
    • Добавьте 40-50 µl элюционного буфера в центр колонки
    • Выдерживайте при комнатной температуре в течение 1 минуты
    • Центрифугируйте 2 минуту при 10 000 g
    • Храните ДНК при 4°С или -20°С

Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой