Набор для выделения ДНК из дрожжей Набор реактивов для получения геномной ДНК из дрожжей, в колонках
|
 |
Механизм выделения днк базируется на адсорбции ДНК на силикагелевой мембране в центрифужных колонках. Это позволяет полностью ликвидировать ингибиторы ПЦР - такие, как, двухвалентные катионы и белки, получая в результате геномную ДНК высокой степени очистки.
В данном методе выделения ДНК не применяется фенол или хлороформ, благодаря чему работа с набором безопасна, а также не образуется вредных отходов. Набор для выделения ДНК в колонках позволяет получать выход до 30 µg ДНК на выделение, размер молекул от 200 bp до 50 kb.
| Название | Код | Цена | Количество | |
| L pack | PP-215L | по запросу | 250 preparations | |
| S pack | PP-215S | по запросу | 50 preparations | |
| Sample | PP-215XS | по запросу | 10 preparations |
| Документы |
|---|
 Datasheet
|
Дополнительно понадобится (не поставляется в комплекте):
- 96-99% этиловый спирт
- Бидистиллированная вода
- Пробирки 1,5 - 2 мл.
Предварительные процедуры: Перед началом необходимо разбавить некоторые реактивы бидистиллированной водой, 96-99% этиловым спиртом или смешать между собой согласно приведенной далее таблице:
Состав набора
| PP-215XS (10 проб) |
PP-215S (50 проб) |
PP-215L (250 проб) |
|
| Буфер для ресуспендирования | 3.2 мл. | 16 мл. | 80 мл. |
| Литиказа (2.5 units/мкл)) | 35 units (добавить 14 мкл буфера литиказы) | 175 units (добавить 70 мкл буфера литиказы) | 5 x 175 units (добавить 70 мкл буфера литиказы в каждую пробирку) |
| Буфер литиказы | 14 мкл | 70 мкл | 350 мкл |
| Буфер для лизиса | 3.2 мл. | 16 мл. | 80 мл. |
| Буфер для связывания | 3.2 мл. | 16 мл. | 80 мл. |
| РНКаза A | 1.5 мг (добавить 30 µl воды) | 7.5 мг (добавить 150 µl воды) | 5x 7.5 мг (добавить 150 µl воды к каждой пробирке) |
| Протеиназа K | 1 мг (добавить 100 µl воды) | 5 мг (добавить 500 µl воды) | 5x 5 мг(добавить 500 µl воды к каждой пробирке) |
| Буфер для активации | 1.2 мл. | 6 мл. | 30 мл. |
| Отмывочный буфер | добавить 9.6 мл этанола до итогового объема 12 мл. | добавить 48 мл этанола до итогового объема 60 мл. | добавить в каждую бутыль 120 мл этанола до итогового объема 150 мл. |
| Элюционный буфер | 1 мл. | 5 мл. | 25 мл. |
Важно использовать верное количество анализируемого образца для того, чтобы получить оптимальный выход и степень очистки ДНК. В одной пробе может быть обработано до 1 - 2 x 107 дрожжевых клеток. Клеточный осадок может храниться замороженным при -70°C в течение нескольких месяцев.
Выделение ДНК из дрожжей
-
Ресуспендирование и лизис клеток дрожжей
- Осадите 500 мкл культивируемых дрожжевых клеток центрифугированием при 8 000 g в течение 1 минуты
- Удалите надосадочную жидкость и немедленно приступайте к следующему шагу
- Внесите 100 µl буфера для ресуспендирования и 1 µl Литиказы в клеточный осадок
- Интенсивно встряхните на вортексе 10 сек
- Выдерживайте 15 минут при 37°С
- Центрифугируйте в течение 1 минуты при 10 000 g
- Удалите супернатант
- Добавьте 300 µl буфера для лизиса и 2 µl РНКазы А в клеточный осадок
- Энергично перемешайте на вортексе 10 сек
- Добавьте 8 µl Протеиназы К и пипетируйте для перемешивания
- Инкубируйте 10 минут при 60°С и остужайте на льду 5 минут
- Добавьте 300 µl буфера для связывания и немного встряхните на вортексе
- Поместите пробирку на лед на 5 минут
- Центрифугируйте 5 минут при 10 000 g
-
Активация колонки (опционально):
- Поместите спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов
- Внесите 100 µl буфера для активации в спин-колонку
- Центрифугируйте в течение 30 секунд при 10 000 g и сразу же следуйте к следующему пункту
- Удалите фильтрат
-
Загрузка колонок:
- Вставьте спин-колонку в 2 мл пробирку для образцов (если этого не было сделано на предыдущем этапе)
- Поместите надосадочную жидкость(лизат) прямо в спин-колонку
- Центрифугируйте 1 мин при 10 000 g
- Удалите фильтрат
-
Первичная отмывка:
- Внесите 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
- Центрифугируйте в течение 30 секунд при 10 000 g
- Удалите фильтрат
-
Вторичная отмывка:
- Добавьте 500 µl отмывочного буфера в спин-колонку
- Центрифугируйте 30 сек при 10 000 g
- Удалите отфильтровавшуюся жидкость
- Еще раз центрифугируйте 1 минуту при 10 000 g, чтобы удалить остатки отмывочного буфера
- Удалите 2 мл отмывочную пробирку и вставьте колонку в пробирку для выделения
-
Выделение ДНК:
- Добавьте 40-50 µl элюционного буфера в центр колонки
- Выдерживайте при комнатной температуре в течение 1 минуты
- Центрифугируйте 2 минуту при 10 000 g
- Храните ДНК при 4°С или -20°С
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
