Набор для выделения ДНК из крови PP-205 Очистка геномной ДНК из цельной крови, в растворе
|
 |
Поскольку при выделении ДНК этим методом не применяется фенол или хлороформ, работа с набором безопасна, а также не образуется вредных отходов. Набор для выделения ДНК в растворе гарантирует минимальную фрагментацию ДНК и получение молекул размером до 150 kb.
Ожидаемый выход геномной ДНК может варьировать от пробы к пробе в зависимости от количества, качества и вида обрабатываемого материала. Количество получаемой из 300 µl цельной крови очищенной ДНК составляет приблизительно 30-50 µg. Если требуется большее количество ДНК, возможно увеличение масштабов реакции до 10 раз.
Другие наборы для выделения ДНК >>
| Название | Код | Цена | Количество | |
| L pack | PP-205L | по запросу | 500 preparations | |
| S pack | PP-205S | по запросу | 100 preparations | |
| Sample | PP-205XS | по запросу | 20 preparations |
| Документы |
|---|
 Datasheet
|
Дополнительно понадобится (не поставляется в комплекте):
- Изопропанол (2-пропанол) >99%
- 96-99% этиловый спирт
- Бидистиллированная вода
- Пробирки 1,5 - 2 мл.
- Нагревательный блок или водяная баня на 65°C.
Предварительные процедуры: Перед началом выделения ДНК необходимо убедиться в наличии у вас изопропанола (2-пропанола) >99% и разбавить отмывочный буфер 96-99% этиловым спиртом согласно приведенной далее таблице:
Состав набора
| PP-205XS (20 проб) |
PP-205S (100 проб) |
PP-205L (500 проб) |
|
| RBC-лизирующий раствор (для лизиса эритроцитов) | 19.2 мл. | 96 мл. | 2x 240 мл. |
| Раствор клеточного лизиса | 6.4 мл. | 32 мл. | 160 мл. |
| Раствор осаждения белка | 2.2 мл. | 11 мл. | 55 мл. |
| Отмывочный буфер | добавить 9.6 мл этилового спирта до итогового объема 12 мл. | добавить 48 мл этилового спирта до итогового объема 60 мл. | добавить в каждую бутыль 120 мл этилового спирта до итогового объема 150 мл. |
| Раствор гидратации ДНК | 2.2 мл. | 11 мл. | 55 мл. |
Важно использовать верное количество анализируемого образца для того, чтобы получить оптимальный выход и степень очистки ДНК. В одной пробе может быть обработано до 1 - 2 x 107 дрожжевых клеток. Клеточный осадок может храниться замороженным при -70°C в течение нескольких месяцев.
Выделение ДНК из крови
-
Лизис клеток
- Поместите 900 µl RBC-лизирующего раствора в 1.5 мл. пробирки, добавьте 300 µl цельной крови или костного мозга и перемешайте переворачиванием 10 раз.
- Инкубируйте 3 минуты при комнатной температуре, иногда переворачивая. Обратите внимание: для свежей крови, собранной в течение 1 часа до обработки, увеличьте время инкубирования до 10 минут чтобы обеспечить полный лизис эритроцитов.
- Центрифугируйте в течение 30 секунд при 15 000 g
- Удалите супернатант пипеткой, оставив видимый клеточный осадок. Убедитесь, что остаток жидкости не превышает 20 µl. Это критическое значение для эффективного осаждения белков и ДНК в последующих шагах.
- Интенсивно перемешайте пробирку на вортексе 10 секунд для ресуспендирования белых кровяных клеток в оставшейся жидкости. Осадок белых кровяных клеток должен быть полностью ресуспендирован.
- Добавьте 300 µl раствора клеточного лизиса к ресуспендированным клеткам и перемешайте пипетированием для лизирования клеток до тех пор, пока сгустки не перестанут быть видимы.
- Для обработанной гепарином крови нагревайте осадок белых кровяных клеток в течение 10 минут при 65°C для облегчения лизиса.
-
Осаждение белка:
- Добавьте 100 µl раствора осаждения белка к клеточному лизату.
- Интенсивно встряхните пробирку с лизатом: для хорошего перемешивания держите ее на вортексе около 20 секунд. Должны быть видны крошечные частицы белка (не сгустки).
- Центрифугируйте в течение 1 минуты при 15 000 g
- Осажденные белки должны образовать плотный темный осадок. Если белковый осадок не плотный, встряхните еще раз пробирку на вортексе с последующим инкубированием на льду в течение 5 минут и повторным центрифугированием.
-
Осаждение ДНК:
- Внесите 300 µl изопропанола >99% в чистую 1.5 мл пробирку и добавьте супернатант.
- Аккуратно перемешайте, переворачивая пробирку в течение 1 минут.
- Центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g. ДНК должна быть видима как небольшой белый осадок.
- Удалите супернатант и осушите пробирку чистой фильтровальной бумагой.
- Добавьте к осадку 500 µl отмывочного буфера и переверните пробирку несколько раз для отмывки осадка ДНК.
- Центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g.
- Аккуратно удалите этанол и просушите при комнатной температуре от 10 до 15 минут.
-
Гидратирование ДНК:
- Добавьте 50-100 µl раствора гидратации ДНК.
- Перемешайте на вортексе 5 секунад на средней скорости.
- Инкубируйте при 65°C в течение 30 минут для ускорения регидратации.
- Храните ДНК при 4°C. Для долгого хранения поместите образцы в температуру -20°C или -80°C.
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
