1. Каталог >
  2. Реактивы >
  3. Объекты >
  4. ДНК >
  5. Выделение ДНК из биологического материала >
  6. Выделение геномной ДНК, в растворе >

Набор для выделения ДНК из крови PP-205

Очистка геномной ДНК из цельной крови, в растворе

Комплект реагентов PP-205 используется для быстрого и удобного выделения ДНК из образцов крови. Метод выделения ДНК, основанный на растворах, минимизирует фрагментацию ДНК, в отличие от выделения адсорбционным или фильтрационным методом.

Поскольку при выделении ДНК этим методом не применяется фенол или хлороформ, работа с набором безопасна, а также не образуется вредных отходов. Набор для выделения ДНК в растворе гарантирует минимальную фрагментацию ДНК и получение молекул размером до 150 kb.

Ожидаемый выход геномной ДНК может варьировать от пробы к пробе в зависимости от количества, качества и вида обрабатываемого материала. Количество получаемой из 300 µl цельной крови очищенной ДНК составляет приблизительно 30-50 µg. Если требуется большее количество ДНК, возможно увеличение масштабов реакции до 10 раз.

Другие наборы для выделения ДНК >>

Название Код Цена Количество
L pack PP-205L по запросу 500 preparations
S pack PP-205S по запросу 100 preparations
Sample PP-205XS по запросу 20 preparations


Документы
Datasheet


Дополнительно понадобится (не поставляется в комплекте):
  • Изопропанол (2-пропанол) >99%
  • 96-99% этиловый спирт
  • Бидистиллированная вода
  • Пробирки 1,5 - 2 мл.
  • Нагревательный блок или водяная баня на 65°C.

Предварительные процедуры: Перед началом выделения ДНК необходимо убедиться в наличии у вас изопропанола (2-пропанола) >99% и разбавить отмывочный буфер 96-99% этиловым спиртом согласно приведенной далее таблице:

Состав набора

PP-205XS
(20 проб)
PP-205S
(100 проб)
PP-205L
(500 проб)
RBC-лизирующий раствор (для лизиса эритроцитов) 19.2 мл. 96 мл. 2x 240 мл.
Раствор клеточного лизиса 6.4 мл. 32 мл. 160 мл.
Раствор осаждения белка 2.2 мл. 11 мл. 55 мл.
Отмывочный буфер добавить 9.6 мл этилового спирта до итогового объема 12 мл. добавить 48 мл этилового спирта до итогового объема 60 мл. добавить в каждую бутыль 120 мл этилового спирта до итогового объема 150 мл.
Раствор гидратации ДНК 2.2 мл. 11 мл. 55 мл.

Важно использовать верное количество анализируемого образца для того, чтобы получить оптимальный выход и степень очистки ДНК. В одной пробе может быть обработано до 1 - 2 x 107 дрожжевых клеток. Клеточный осадок может храниться замороженным при -70°C в течение нескольких месяцев.

Выделение ДНК из крови

  1. Лизис клеток
    • Поместите 900 µl RBC-лизирующего раствора в 1.5 мл. пробирки, добавьте 300 µl цельной крови или костного мозга и перемешайте переворачиванием 10 раз.
    • Инкубируйте 3 минуты при комнатной температуре, иногда переворачивая. Обратите внимание: для свежей крови, собранной в течение 1 часа до обработки, увеличьте время инкубирования до 10 минут чтобы обеспечить полный лизис эритроцитов.
    • Центрифугируйте в течение 30 секунд при 15 000 g
    • Удалите супернатант пипеткой, оставив видимый клеточный осадок. Убедитесь, что остаток жидкости не превышает 20 µl. Это критическое значение для эффективного осаждения белков и ДНК в последующих шагах.
    • Интенсивно перемешайте пробирку на вортексе 10 секунд для ресуспендирования белых кровяных клеток в оставшейся жидкости. Осадок белых кровяных клеток должен быть полностью ресуспендирован.
    • Добавьте 300 µl раствора клеточного лизиса к ресуспендированным клеткам и перемешайте пипетированием для лизирования клеток до тех пор, пока сгустки не перестанут быть видимы.
    • Для обработанной гепарином крови нагревайте осадок белых кровяных клеток в течение 10 минут при 65°C для облегчения лизиса.
  2. Осаждение белка:
    • Добавьте 100 µl раствора осаждения белка к клеточному лизату.
    • Интенсивно встряхните пробирку с лизатом: для хорошего перемешивания держите ее на вортексе около 20 секунд. Должны быть видны крошечные частицы белка (не сгустки).
    • Центрифугируйте в течение 1 минуты при 15 000 g
    • Осажденные белки должны образовать плотный темный осадок. Если белковый осадок не плотный, встряхните еще раз пробирку на вортексе с последующим инкубированием на льду в течение 5 минут и повторным центрифугированием.
  3. Осаждение ДНК:
    • Внесите 300 µl изопропанола >99% в чистую 1.5 мл пробирку и добавьте супернатант.
    • Аккуратно перемешайте, переворачивая пробирку в течение 1 минут.
    • Центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g. ДНК должна быть видима как небольшой белый осадок.
    • Удалите супернатант и осушите пробирку чистой фильтровальной бумагой.
    • Добавьте к осадку 500 µl отмывочного буфера и переверните пробирку несколько раз для отмывки осадка ДНК.
    • Центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g.
    • Аккуратно удалите этанол и просушите при комнатной температуре от 10 до 15 минут.
  4. Гидратирование ДНК:
    • Добавьте 50-100 µl раствора гидратации ДНК.
    • Перемешайте на вортексе 5 секунад на средней скорости.
    • Инкубируйте при 65°C в течение 30 минут для ускорения регидратации.
    • Храните ДНК при 4°C. Для долгого хранения поместите образцы в температуру -20°C или -80°C.

Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой