1. Каталог >
  2. Реактивы >
  3. Объекты >
  4. ДНК >
  5. Выделение ДНК из биологического материала >
  6. Выделение геномной ДНК, в растворе >

Набор для выделения ДНК из бактерий PP-206

Очистка геномной ДНК из бактерий, в растворе

Набор реагентов PP-206 предназначен для быстрого и удобного выделения ДНК из грам-положительных и грам-отрицательных бактерий. Система выделения ДНК, основанная на растворах, сводит к минимуму фрагментацию ДНК, в отличие от выделения такими способами, как адсорбционный или фильтрационный.

Поскольку при выделении ДНК этим способом не используется хлороформ или фенол, работа с набором безопасна, а также не образуется вредных отходов. Комплект для выделения ДНК в обеспечивает наименьшее количество разрывов ДНК с возможностью выделять молекулы длиной до 150 kb.

Предполагаемое количество ДНК может изменяться от образца к образцу в зависимости от количества, качества и других характеристик используемого материала. Можно ожидать выход около 40 µg в одной реакции.

Другие наборы для выделения ДНК >>

Название Код Цена Количество
L pack PP-206L по запросу 500 preparations
S pack PP-206S по запросу 100 preparations
Sample PP-206XS по запросу 20 preparations


Документы
Datasheet


Также понадобится (не входит в поставку набора):
  • Изопропанол (2-пропанол) >99%
  • 96-99% этанол
  • Бидистиллированная вода
  • Пробирки 1,5 - 2 мл.
  • Водяная баня или нагревательный блок на 37°C и 65°C.

Предварительная подготовка: Перед тем, как приступить к выделению ДНК, необходимо подготовить изопропанол (2-пропанол) >99%, добавить в отмывочный буфер 96-99% этанол, разбавить Лизоцим и РНКазу бидистиллированной водой в соответствии с приведенной далее информацией:

Состав комплекта

PP-206XS
(20 проб)
PP-206S
(100 проб)
PP-206L
(500 проб)
Жидкость для клеточного ресуспендирования 6.4 мл 32 мл 160 мл
Лизоцим (100 мг/мл) 5 мг (добавить 50 µl воды) 25 мг (добавить 250 µl воды) 5х 25 мг (добавить 250 µl воды в каждую пробирку)
РНКаза А (4 мг/мл) 0.16 мг (добавить 40 µl воды) 0.8 мг (добавить 200 µl воды) 5х 0.8 мг (добавить 200 µl воды в каждую пробирку)
Раствор клеточного лизиса 6.4 мл 32 мл 160 мл
Раствор белковой коагуляции 2.2 мл 11 мл 55 мл
Отмывочный раствор добавить 9.6 мл этанола до итогового количества 12 мл добавить 48 мл этанола до итогового количества 60 мл добавить в каждую бутыль 120 мл этанола до итогового количества 150 мл
Раствор гидратации ДНК 2.2 мл 11 мл 55 мл

Выделение ДНК из грам-положительных и грам-отрицательных бактерий

  1. Лизис клеток:
    • Поместите 1 мл культивируемых клеток в пробирку на 1.5 мл.
    • Осадите клетки, центрифугируя при 15 000 g в течение 1 минуты и удалите супернатант.
    • Ресуспендируйте клеточную массу в 300 мкл жидкости для клеточного ресуспендирования.
    • При выделении ДНК из грам-положительных бактерий:
      • Добавьте 2 µl раствора лизоцима и хорошо перемешайте переворачиванием.
      • Инкубируйте в течение 60 минут (?) при 37°С, периодически переворачивая.
      • Центрифугируйте в течение 1 минуты при 15 000 g и удалите супернатант.
    • Ресуспендируйте осадок в 300 µl раствора для клеточного лизиса.
  2. Удаление РНК:
    • Добавьте 1.5 µl раствора РНКазы А и перемешайте переворачиванием.
    • Инкубируйте в течение 15-30 минут при 37°С и охладите на льду в течение 1 минуты.
  3. Осаждение белка:
    • Влейте в пробирку 100 µl раствора белковой коагуляции и интенсивно перемешайте ее на вортексе 20-30 секунд.
    • Осадите белок в центрифуге в течение 5 минут при 15 000 g
  4. Осаждение ДНК:
    • Влейте в новую пробирку на 1.5 мл 300 µl изопропанола >99% и перенесите в нее надосадочную жидкость из клеточного лизата .
    • Переворачивайте пробирку в течение 1 минуты для перемешивания раствора.
    • Центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g. Должен образоваться небольшой, но заметный, белый осадок ДНК.
    • Удалите надосадочную жидкость и осушите пробирку чистой фильтровальной бумагой.
    • Внесите в пробирку 500 µl отмывочного буфера несколько раз перемешайте переворачиванием для растворения ДНК.
    • Осаждайте ДНК 1 минуту при 15 000 g.
    • Аккуратно удалите этанол и дайте остаткам испариться при комнатной температуре от 10 до 15 минут.
  5. Гидратирование ДНК:
    • Добавьте 50-100 µl раствора гидратации ДНК.
    • Гидратируйте ДНК выдерживанием при 65°C в течение 60 минут.
    • Храните ДНК при 4°C. На длительное хранение убирайте ДНК в морозильник -20°C или -80°C.

Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой