Набор для выделения ДНК из растений и растительных тканей PP-207 Очистка геномной ДНК из растительных тканей, в растворе
|
 |
Поскольку при выделении ДНК с использованием этого набора не задействуется фенол или хлороформ, работа с набором безопасна, а также не образуется вредных отходов. Методом выделения ДНК в растворе получается малофрагментированная ДНК размером до 150 kb.
Количество ДНК, которое ожидается получить, может различаться в разных образцах в зависимости от качества, количества и вида обрабатываемых образцов. В одной реакции предполагается получение количеств ДНК примерно 25 µg.
Другие наборы для выделения ДНК >>
| Название | Код | Цена | Количество | |
| L pack | PP-207L | по запросу | 500 preparations | |
| S pack | PP-207S | по запросу | 100 preparations | |
| Sample | PP-207XS | по запросу | 20 preparations |
| Документы |
|---|
 Datasheet
|
Дополнительно потребуется (не поставляется в составе набора):
- Изопропанол (2-пропанол) >99%
- 96-99% этиловый спирт
- Вода двойной дистилляции
- Пробирки 1,5 - 2 мл.
- Средства инкубирования на 37°C и 65°C.
Подготовка к работе: Перед началом работы с набором необходимо обеспечить наличие изопропанола (2-пропанола) >99%, развести отмывочный буфер 96-99% этиловым спиртом, растворить РНКазу в воде согласно приведенной далее таблице:
Комплектация набора
| PP-207XS (20 проб) |
PP-207S (100 проб) |
PP-207L (500 проб) |
|
| РНКаза А (4 мг/мл) | 0.16 мг (добавить 40 µl воды) | 0.8 мг (добавить 200 µl воды) | 5х 0.8 мг (добавить 200 µl воды в каждую пробирку) |
| Раствор клеточного лизиса | 6.4 мл | 32 мл | 160 мл |
| Буфер коагуляции белка | 2.2 мл | 11 мл | 55 мл |
| Буфер для отмывки | Растворить в 9.6 мл этилового спирта (до итогового объема 12 мл) | Растворить в 48 мл этилового спирта (до итогового объема 60 мл) | Растворить в в каждую бутыль 120 мл (этилового спирта до итогового объема 150 мл) |
| Раствор гидратации ДНК | 2.2 мл | 11 мл | 55 мл |
Выделение ДНК из растений и растительных тканей
-
Сбор и подготовка образцов:
- Перед выделением ДНК свежую или замороженную ткань тонко измельчите пестиком в ступке в житком азоте.
- Работайте быстро и сохраняйте ткань холодной для минимизации активности ДНКаз.
-
Лизис клеток:
- Поместите 10-30 мг тонко измельченной ткани в пробирку на 1.5 мл.
- Добавьте к ткани 300 µl раствора клеточного лизиса
- Инкубируйте в течение 60 минут (?) при 65°С.
- Периодически переворачивайте пробирку в процессе инкубирования.
-
Обработка РНКазой:
- Добавьте к клеточному лизату 1.5 µl раствора РНКазы А.
- Перемешайте образец переворачиванием пробирки 25 раз и инкубируйте 15-60 минут при 37°С.
-
Осаждение белка:
- Охладите клеточный лизат при комнатной температуре и добавьте к нему 100 µl буфера коагуляции белка.
- Хорошо встряхните пробирку на вортексе.
- Осадите белок при 15 000 g в течение 3 минут (после центрифугирования на дне пробирки должен образоваться хорошо спрессованный зеленый сгусток. Если белок не сформировал плотный сгусток, повторите перемешивание, выдерживайте на льду 10 минут и центрифугируйте повторно).
-
Осаждение ДНК:
- Перенесите содержащий ДНК супернатант в чистую 1.5 мл пробирку, содержащую 300 µl изопропанола >99%.
- Аккуратно перемешайте содержимое пробирки переворачиванием (около 50 раз).
- Осадите ДНК при 15 000 g в течение 1 минуты. ДНК будет заметка как осадок цветом от оттенков белого до светло-зеленого.
- Извлеките пипеткой супернатант, а остатки впитайте чистой фильтровальной бумагой.
- Влейте 500 µl отмывочного буфера и переверните пробирку несколько раз для перемешивания и отмывки осадка.
- Центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g.
- Аккуратно удалите этанол и оставьте пробирку открытой для высыхания при комнатной температуре от 10 до 15 минут.
-
Гидратирование ДНК:
- Добавьте 50-100 µl раствора гидратации ДНК.
- Гидратируйте ДНК выдерживанием при 65°C в течение часа.
- Храните ДНК при 4°C. Для долгого хранения поместите образцы в температуру -20°C или -80°C.
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
