1. Каталог >
  2. Реактивы >
  3. Объекты >
  4. ДНК >
  5. Выделение ДНК из биологического материала >
  6. Выделение геномной ДНК, в растворе >

Набор для выделения ДНК из растений и растительных тканей PP-207

Очистка геномной ДНК из растительных тканей, в растворе

Комплект реактивов PP-207 используется для быстрого и удобного выделения ДНК из растений и растительных тканей. Метод выделения ДНК очисткой в растворах минимизирует повреждение ДНК, в отличие от выделения адсорбционным или фильтрационным способом.

Поскольку при выделении ДНК с использованием этого набора не задействуется фенол или хлороформ, работа с набором безопасна, а также не образуется вредных отходов. Методом выделения ДНК в растворе получается малофрагментированная ДНК размером до 150 kb.

Количество ДНК, которое ожидается получить, может различаться в разных образцах в зависимости от качества, количества и вида обрабатываемых образцов. В одной реакции предполагается получение количеств ДНК примерно 25 µg.

Другие наборы для выделения ДНК >>

Название Код Цена Количество
L pack PP-207L по запросу 500 preparations
S pack PP-207S по запросу 100 preparations
Sample PP-207XS по запросу 20 preparations


Документы
Datasheet


Дополнительно потребуется (не поставляется в составе набора):
  • Изопропанол (2-пропанол) >99%
  • 96-99% этиловый спирт
  • Вода двойной дистилляции
  • Пробирки 1,5 - 2 мл.
  • Средства инкубирования на 37°C и 65°C.

Подготовка к работе: Перед началом работы с набором необходимо обеспечить наличие изопропанола (2-пропанола) >99%, развести отмывочный буфер 96-99% этиловым спиртом, растворить РНКазу в воде согласно приведенной далее таблице:

Комплектация набора

PP-207XS
(20 проб)
PP-207S
(100 проб)
PP-207L
(500 проб)
РНКаза А (4 мг/мл) 0.16 мг (добавить 40 µl воды) 0.8 мг (добавить 200 µl воды) 5х 0.8 мг (добавить 200 µl воды в каждую пробирку)
Раствор клеточного лизиса 6.4 мл 32 мл 160 мл
Буфер коагуляции белка 2.2 мл 11 мл 55 мл
Буфер для отмывки Растворить в 9.6 мл этилового спирта (до итогового объема 12 мл) Растворить в 48 мл этилового спирта (до итогового объема 60 мл) Растворить в в каждую бутыль 120 мл (этилового спирта до итогового объема 150 мл)
Раствор гидратации ДНК 2.2 мл 11 мл 55 мл

Выделение ДНК из растений и растительных тканей

  1. Сбор и подготовка образцов:
    • Перед выделением ДНК свежую или замороженную ткань тонко измельчите пестиком в ступке в житком азоте.
    • Работайте быстро и сохраняйте ткань холодной для минимизации активности ДНКаз.
  2. Лизис клеток:
    • Поместите 10-30 мг тонко измельченной ткани в пробирку на 1.5 мл.
    • Добавьте к ткани 300 µl раствора клеточного лизиса
    • Инкубируйте в течение 60 минут (?) при 65°С.
    • Периодически переворачивайте пробирку в процессе инкубирования.
  3. Обработка РНКазой:
    • Добавьте к клеточному лизату 1.5 µl раствора РНКазы А.
    • Перемешайте образец переворачиванием пробирки 25 раз и инкубируйте 15-60 минут при 37°С.
  4. Осаждение белка:
    • Охладите клеточный лизат при комнатной температуре и добавьте к нему 100 µl буфера коагуляции белка.
    • Хорошо встряхните пробирку на вортексе.
    • Осадите белок при 15 000 g в течение 3 минут (после центрифугирования на дне пробирки должен образоваться хорошо спрессованный зеленый сгусток. Если белок не сформировал плотный сгусток, повторите перемешивание, выдерживайте на льду 10 минут и центрифугируйте повторно).
  5. Осаждение ДНК:
    • Перенесите содержащий ДНК супернатант в чистую 1.5 мл пробирку, содержащую 300 µl изопропанола >99%.
    • Аккуратно перемешайте содержимое пробирки переворачиванием (около 50 раз).
    • Осадите ДНК при 15 000 g в течение 1 минуты. ДНК будет заметка как осадок цветом от оттенков белого до светло-зеленого.
    • Извлеките пипеткой супернатант, а остатки впитайте чистой фильтровальной бумагой.
    • Влейте 500 µl отмывочного буфера и переверните пробирку несколько раз для перемешивания и отмывки осадка.
    • Центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g.
    • Аккуратно удалите этанол и оставьте пробирку открытой для высыхания при комнатной температуре от 10 до 15 минут.
  6. Гидратирование ДНК:
    • Добавьте 50-100 µl раствора гидратации ДНК.
    • Гидратируйте ДНК выдерживанием при 65°C в течение часа.
    • Храните ДНК при 4°C. Для долгого хранения поместите образцы в температуру -20°C или -80°C.

Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой