Каталог > Реактивы > Объекты > ДНК > Выделение ДНК из биологического материала > Выделение геномной ДНК, в растворе >
Набор для выделения ДНК из тканей животных и грибов PP-208 Очистка геномной ДНК из животных тканей и грибов, в растворе

Документы
Datasheet

• Изопропанол (2-пропанол) >99%
• 96-99% этанол
• Вода двойной дистилляции
• Пробирки 1,5 - 2 мл.
• Нагревательный блок или водяная баня на 37°C и 65°C.

В набор входит

Выделение ДНК из животных тканей и грибов

1. Лизис клеток:
   • При выделении ДНК из животных тканей:
     • Поместите 5-10 мг свежей или замороженной ткани в пробирку на 1.5 мл.
     • Добавьте к ткани 300 µl раствора клеточного лизиса
     • Добавьте 1.5 µl раствора Протеиназы К к лизату и несколько раз перемешайте переворачиванием.
     • Оставьте на ночь при 55°С или инкубируйте пока ткань не растворится.
   • При выделении ДНК из грибов:
     • Поместите 1 мл культивируемых клеток в пробирку на 1.5 мл.
     • Соберите клетки центрифугированием при 15 000 g в течение 1 минуты и удалите супернатант
     • Ресуспендируйте клеточный осадок в 300 µl состава для ресуспендирования клеток
     • Добавьте 1.5 µl раствора Протеиназы К к лизату и несколько раз перемешайте переворачиванием.
     • Инкубируйте при 55°С в течени 60 минут.
     • Центрифугируйте при 15 000 g в течение 1 минуты и удалите супернатант.
     • Инкубируйте при 55°С в течени 60 минут.
     • Ресуспендируйте клеточный осадок в 300 µl раствора клеточного лизиса
2. Обработка РНКазой:
   • Добавьте 1.5 µl раствора РНКазы А к клеточному лизату.
   • Перемешайте образец переворачиванием пробирки и инкубируйте 30-60 минут при 37°С.
3. Осаждение белка:
   • Добавьте 100 µl буфера белкового осаждения к клеточному лизату.
   • Хорошо встряхните раствор в течение 20 сек, используя вортекс.
   • Центрифугируйте в течение 3 минут при 15 000 g (осаждение должно дать плотный осадок. При формировании недостаточно плотного сгустка, перемешайте клеточный лизат на вортексе, охладите на льду 10 минут и еще раз осадите в центрифуге с теми же условиями).
4. Осаждение ДНК:
   • Возьмите чистую 1.5 мл пробирку, внесите в нее 300 µl изопропанола >99% и надосадочную жидкость из предыдущей пробирки.
   • Перемешайте жидкость, аккуратно переворачивая пробирку 50 раз.
   • Центрифугируйте для осаждения ДНК 1 минуту при 15 000 g. ДНК образует небольшой налет на дне пробирки цветом от оттенков белого до светло-зеленого.
   • С помощью пипетки извлеките надосадочную жидкость и впитайте чистой фильтровальной бумагой остаточные его количества.
   • Добавьте 500 µl отмывочного буфера и переверните пробирку несколько раз для растворения осадка ДНК.
   • Осаждайте ДНК в течение 60 секунд при 15 000 g. Аккуратно удалите этанол.
   • Просушите на воздухе при комнатной температуре от 10 до 15 минут.
5. Гидратирование ДНК:
   • Добавьте 50-100 µl раствора гидратации ДНК к просушенному осадку ДНК.
   • Гидратируйте ДНК инкубированием пробирки при 65°C в течение 60 минут.
   • Храните ДНК при 4°C. Чтобы сохранить ДНК в течение длительного времени, замораживайте препарат при температуре -20°C или -80°C.

Выделение геномной ДНК, в растворе