1. Каталог >
  2. Реактивы >
  3. Объекты >
  4. ДНК >
  5. Выделение ДНК из биологического материала >
  6. Выделение геномной ДНК, в растворе >

Набор для выделения ДНК из тканей животных и грибов PP-208

Очистка геномной ДНК из животных тканей и грибов, в растворе

Набор реактивов PP-208 предназначен для быстрого и удобного выделения ДНК из тканей животных и грибов. Система выделения ДНК, очисткой в растворах максимально уменьшает фрагментацию ДНК, в отличие от выделения адсорбционной или фильтрационной методикой.

Поскольку при выделении ДНК с применением этого комплекта не применяется хлороформ или фенол, работа с набором безопасна, а также не образуется вредных отходов. Процесс выделения ДНК в растворе снижает количество разрывов ДНК и позволяет получать последовательности до 150 kb.

Другие наборы для выделения ДНК >>

Название Код Цена Количество
L pack PP-208L по запросу 500 preparations
S pack PP-208S по запросу 100 preparations
Sample PP-208XS по запросу 20 preparations


Документы
Datasheet


Также потребуется (не входит в набор):
  • Изопропанол (2-пропанол) >99%
  • 96-99% этанол
  • Вода двойной дистилляции
  • Пробирки 1,5 - 2 мл.
  • Нагревательный блок или водяная баня на 37°C и 65°C.

Приготовления к работе: Приступая к работе необходимо убедиться в наличии у вас изопропанола (2-пропанола) >99%, произвести разбавление отмывочного буфера 96-99% этиловым спиртом, добавить воду в РНКазу и Протеиназу К согласно приведенныч далее указаниям:

В набор входит

PP-208XS
(20 проб)
PP-208S
(100 проб)
PP-208L
(500 проб)
Раствор клеточного лизиса 6.4 мл 32 мл 160 мл
Состав для ресуспендирования клеток 6.4 мл 32 мл 160 мл
Протеиназа К 0.8 мг (добавить 40 µl воды) 4 мг (добавить 200 µl воды) 5х 4 мг (добавить 200 µl воды в каждую пробирку)
РНКаза А (4 мг/мл) 0.16 мг (добавить 40 µl воды) 0.8 мг (добавить 200 µl воды) 5х 0.8 мг (добавить 200 µl воды в каждую пробирку)
Буфер белкового осаждения 2.2 мл 11 мл 55 мл
Отмывочный буфер добавить 9.6 мл этанола до итогового значения 12 мл добавить 48 мл этанола до итогового значения 60 мл добавить в каждую бутыль 120 мл этанола до итогового значения 150 мл
Раствор гидратации ДНК 2.2 мл 11 мл 55 мл

Выделение ДНК из животных тканей и грибов

  1. Лизис клеток:
    • При выделении ДНК из животных тканей:
      • Поместите 5-10 мг свежей или замороженной ткани в пробирку на 1.5 мл.
      • Добавьте к ткани 300 µl раствора клеточного лизиса
      • Добавьте 1.5 µl раствора Протеиназы К к лизату и несколько раз перемешайте переворачиванием.
      • Оставьте на ночь при 55°С или инкубируйте пока ткань не растворится.
    • При выделении ДНК из грибов:
      • Поместите 1 мл культивируемых клеток в пробирку на 1.5 мл.
      • Соберите клетки центрифугированием при 15 000 g в течение 1 минуты и удалите супернатант
      • Ресуспендируйте клеточный осадок в 300 µl состава для ресуспендирования клеток
      • Добавьте 1.5 µl раствора Протеиназы К к лизату и несколько раз перемешайте переворачиванием.
      • Инкубируйте при 55°С в течени 60 минут.
      • Центрифугируйте при 15 000 g в течение 1 минуты и удалите супернатант.
      • Инкубируйте при 55°С в течени 60 минут.
      • Ресуспендируйте клеточный осадок в 300 µl раствора клеточного лизиса
  2. Обработка РНКазой:
    • Добавьте 1.5 µl раствора РНКазы А к клеточному лизату.
    • Перемешайте образец переворачиванием пробирки и инкубируйте 30-60 минут при 37°С.
  3. Осаждение белка:
    • Добавьте 100 µl буфера белкового осаждения к клеточному лизату.
    • Хорошо встряхните раствор в течение 20 сек, используя вортекс.
    • Центрифугируйте в течение 3 минут при 15 000 g (осаждение должно дать плотный осадок. При формировании недостаточно плотного сгустка, перемешайте клеточный лизат на вортексе, охладите на льду 10 минут и еще раз осадите в центрифуге с теми же условиями).
  4. Осаждение ДНК:
    • Возьмите чистую 1.5 мл пробирку, внесите в нее 300 µl изопропанола >99% и надосадочную жидкость из предыдущей пробирки.
    • Перемешайте жидкость, аккуратно переворачивая пробирку 50 раз.
    • Центрифугируйте для осаждения ДНК 1 минуту при 15 000 g. ДНК образует небольшой налет на дне пробирки цветом от оттенков белого до светло-зеленого.
    • С помощью пипетки извлеките надосадочную жидкость и впитайте чистой фильтровальной бумагой остаточные его количества.
    • Добавьте 500 µl отмывочного буфера и переверните пробирку несколько раз для растворения осадка ДНК.
    • Осаждайте ДНК в течение 60 секунд при 15 000 g. Аккуратно удалите этанол.
    • Просушите на воздухе при комнатной температуре от 10 до 15 минут.
  5. Гидратирование ДНК:
    • Добавьте 50-100 µl раствора гидратации ДНК к просушенному осадку ДНК.
    • Гидратируйте ДНК инкубированием пробирки при 65°C в течение 60 минут.
    • Храните ДНК при 4°C. Чтобы сохранить ДНК в течение длительного времени, замораживайте препарат при температуре -20°C или -80°C.

Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой