Набор для выделения ДНК из дрожжей PP-209 Очистка геномной ДНК из дрожжей, в растворе
|
 |
Поскольку при использовании этого набора для выделения ДНК не задействуется фенол или хлороформ, его применение безопасно, а также не образуется вредных отходов. Способ выделения ДНК в растворе обеспечивает наименьшее повреждение ДНК и получение молекул размером до 150 kb.
Выход тотальной ДНК, который предполагается получить, может быть в разных образцах различным - в зависимости от характеристик используемых образцов. В каждой пробе предполагается выход около 10 µg выделенной ДНК.
Другие наборы для выделения ДНК >>
| Название | Код | Цена | Количество | |
| L pack | PP-209L | по запросу | 500 preparations | |
| S pack | PP-209S | по запросу | 100 preparations | |
| Sample | PP-209XS | по запросу | 20 preparations |
| Документы |
|---|
 Datasheet
|
При выделении также необходимо иметь (не включено в поставку комплекта):
- Изопропанол (2-пропанол) >99%
- 96-99% этиловый спирт
- Вода, прошедшая очистку двойной дистилляцией
- Пробирки 1,5 - 2 мл.
- Средства инкубирования на 37°C и 65°C (термостат, нагревательный блок и др.)
Подготовительные операции: Приступая к выделению ДНК необходимо убедиться в наличии у вас изопропанола (2-пропанола) >99%, смешать литиказу и буфер литиказы, добавить в отмывочный буфер соответствующее количество 96-99% этанола, добавить очищенную дистилляцией воду в пробирку с РНКазой как указано далее в таблице:
Набор содержит
| PP-209XS (20 проб) |
PP-209S (100 проб) |
PP-209L (500 проб) |
|
| Состав для клеточного ресуспендирования | 6.4 мл | 32 мл | 160 мл |
| Раствор клеточного лизиса | 6.4 мл | 32 мл | 160 мл |
| Литиказа | 60 единиц (добавить 24 µl литиказного раствора ресуспендирования) | 300 единиц (добавить 120 µl литиказного раствора ресуспендирования) | 5х 300 единиц (добавить 120 µl литиказного раствора ресуспендирования в каждую пробирку) |
| Литиказный раствор ресуспендирования | 26 µl | 130 µl | 650 µl |
| Раствор преципитации протеинов | 2.2 мл | 11 мл | 55 мл |
| РНКаза А (4 мг/мл) | 0.16 мг (разбавить в 40 µl воды) | 0.8 мг (разбавить в 200 µl воды) | 5х 0.8 мг (содержимое каждой пробирки разбавить в 200 µl воды) |
| Отмывочный буфер | добавить 9.6 мл этанола до итогового количества 12 мл | добавить 48 мл этанола до итогового количества 60 мл | добавить в каждую бутыль 120 мл этанола до итогового количества 150 мл |
| Раствор гидратации ДНК | 2.2 мл | 11 мл | 55 мл |
Выделение ДНК из дрожжей
-
Лизис клеток:
- Поместите 1 мл культивируемых клеток в пробирку на 1.5 мл.
- Осадите клетки, центрифугируя при 15 000 g в течение 1 минуты и удалите супернатант.
- Ресуспендируйте клеточную массу в 300 мкл составе для ресуспендирования.
- Добавьте 1 µl раствора Литиказы и перемешайте переворачиванием около 25 раз.
- Поместите пробирку в температуру 37°С на 30-60 минут.
- Центрифугируйте при 15 000 g в течение 1 минуты и удалите супернатант.
- Взболтайте клеточную массу в 300 µl раствора клеточного лизиса
-
Расщепление РНК:
- Добавьте к клеточному лизату 1.5 µl раствора РНКазы А.
- Перемешайте образец переворачиванием пробирки и инкубируйте 30 минут при 37°С.
-
Осаждение белка:
- Добавьте к клеточному лизату 100 µl раствора преципитации протеинов и интенсивно перемешайте раствор на вортексе в течение 20 сек.
- Центрифугируйте при 15 000 g 5 минут.
-
Осаждение ДНК:
- Аккуратно перенесите надосадочную жидкость в чистую пробирку и добавьте к ней 300 µl изопропанола >99%.
- Аккуратно перемешайте переворачиванием пробирки 50 раз.
- Для формирования осадка ДНК центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g. Небольшой осадок ДНК белого цвета должен быть заметен на дне пробирки.
- Супернатант отберите пипеткой, а то, что останется, осушите фрагментом чистой фильтровальной бумаги.
- Внесите 500 µl отмывочного буфера и перемешайте, перевернув пробирку несколько раз, для отмывки осадка ДНК.
- Центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g. Аккуратно удалите этанол.
- Просушите на воздухе при комнатной температуре от 10 до 15 минут.
-
Гидратирование ДНК:
- Добавьте 50-100 µl раствора гидратации ДНК к просушенному осадку ДНК.
- Гидратируйте ДНК инкубированием пробы при 65°C в течение 1 часа.
- Храните ДНК при 4°C. Для сохранения в течение большого времени охлаждайте пробирки до -20°C или -80°C.
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
