1. Каталог >
  2. Реактивы >
  3. Объекты >
  4. ДНК >
  5. Выделение ДНК из биологического материала >
  6. Выделение геномной ДНК, в растворе >

Набор для выделения ДНК из дрожжей PP-209

Очистка геномной ДНК из дрожжей, в растворе

Комплект реагентов PP-209 разработан для быстрого и удобного выделения ДНК из дрожжевых клеток. Метод выделения ДНК, базирующийся на растворах, минимизирует количество разрывов ДНК, в отличие от выделения методами на основе адсорбции или фильтрации.

Поскольку при использовании этого набора для выделения ДНК не задействуется фенол или хлороформ, его применение безопасно, а также не образуется вредных отходов. Способ выделения ДНК в растворе обеспечивает наименьшее повреждение ДНК и получение молекул размером до 150 kb.

Выход тотальной ДНК, который предполагается получить, может быть в разных образцах различным - в зависимости от характеристик используемых образцов. В каждой пробе предполагается выход около 10 µg выделенной ДНК.

Другие наборы для выделения ДНК >>

Название Код Цена Количество
L pack PP-209L по запросу 500 preparations
S pack PP-209S по запросу 100 preparations
Sample PP-209XS по запросу 20 preparations


Документы
Datasheet


При выделении также необходимо иметь (не включено в поставку комплекта):
  • Изопропанол (2-пропанол) >99%
  • 96-99% этиловый спирт
  • Вода, прошедшая очистку двойной дистилляцией
  • Пробирки 1,5 - 2 мл.
  • Средства инкубирования на 37°C и 65°C (термостат, нагревательный блок и др.)

Подготовительные операции: Приступая к выделению ДНК необходимо убедиться в наличии у вас изопропанола (2-пропанола) >99%, смешать литиказу и буфер литиказы, добавить в отмывочный буфер соответствующее количество 96-99% этанола, добавить очищенную дистилляцией воду в пробирку с РНКазой как указано далее в таблице:

Набор содержит

PP-209XS
(20 проб)
PP-209S
(100 проб)
PP-209L
(500 проб)
Состав для клеточного ресуспендирования 6.4 мл 32 мл 160 мл
Раствор клеточного лизиса 6.4 мл 32 мл 160 мл
Литиказа 60 единиц (добавить 24 µl литиказного раствора ресуспендирования) 300 единиц (добавить 120 µl литиказного раствора ресуспендирования) 5х 300 единиц (добавить 120 µl литиказного раствора ресуспендирования в каждую пробирку)
Литиказный раствор ресуспендирования 26 µl 130 µl 650 µl
Раствор преципитации протеинов 2.2 мл 11 мл 55 мл
РНКаза А (4 мг/мл) 0.16 мг (разбавить в 40 µl воды) 0.8 мг (разбавить в 200 µl воды) 5х 0.8 мг (содержимое каждой пробирки разбавить в 200 µl воды)
Отмывочный буфер добавить 9.6 мл этанола до итогового количества 12 мл добавить 48 мл этанола до итогового количества 60 мл добавить в каждую бутыль 120 мл этанола до итогового количества 150 мл
Раствор гидратации ДНК 2.2 мл 11 мл 55 мл

Выделение ДНК из дрожжей

  1. Лизис клеток:
    • Поместите 1 мл культивируемых клеток в пробирку на 1.5 мл.
    • Осадите клетки, центрифугируя при 15 000 g в течение 1 минуты и удалите супернатант.
    • Ресуспендируйте клеточную массу в 300 мкл составе для ресуспендирования.
    • Добавьте 1 µl раствора Литиказы и перемешайте переворачиванием около 25 раз.
    • Поместите пробирку в температуру 37°С на 30-60 минут.
    • Центрифугируйте при 15 000 g в течение 1 минуты и удалите супернатант.
    • Взболтайте клеточную массу в 300 µl раствора клеточного лизиса
  2. Расщепление РНК:
    • Добавьте к клеточному лизату 1.5 µl раствора РНКазы А.
    • Перемешайте образец переворачиванием пробирки и инкубируйте 30 минут при 37°С.
  3. Осаждение белка:
    • Добавьте к клеточному лизату 100 µl раствора преципитации протеинов и интенсивно перемешайте раствор на вортексе в течение 20 сек.
    • Центрифугируйте при 15 000 g 5 минут.
  4. Осаждение ДНК:
    • Аккуратно перенесите надосадочную жидкость в чистую пробирку и добавьте к ней 300 µl изопропанола >99%.
    • Аккуратно перемешайте переворачиванием пробирки 50 раз.
    • Для формирования осадка ДНК центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g. Небольшой осадок ДНК белого цвета должен быть заметен на дне пробирки.
    • Супернатант отберите пипеткой, а то, что останется, осушите фрагментом чистой фильтровальной бумаги.
    • Внесите 500 µl отмывочного буфера и перемешайте, перевернув пробирку несколько раз, для отмывки осадка ДНК.
    • Центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g. Аккуратно удалите этанол.
    • Просушите на воздухе при комнатной температуре от 10 до 15 минут.
  5. Гидратирование ДНК:
    • Добавьте 50-100 µl раствора гидратации ДНК к просушенному осадку ДНК.
    • Гидратируйте ДНК инкубированием пробы при 65°C в течение 1 часа.
    • Храните ДНК при 4°C. Для сохранения в течение большого времени охлаждайте пробирки до -20°C или -80°C.

Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой