Криоконсервирование, в том числе замораживание и оттаивание, важны в технологиях культивирования клеток. Криоконсервирование эмбриональных стволовых (ES) и индуцированных плюрипотентных стволовых (iPS) клеток является более сложным по сравнению с другими клетками. В настоящее время метод витрификации считается подходящим для ES/iPS клеток приматов, хотя метод медленного замораживания с использование ДМСО был популярен для широкого спектра клеточных линий. При витрификации требуются специальные навыки и нежелательно транспортирование на сухом льду. Для преодоления этих проблем мы разработали новую среду для криоконсервации (BambankerTM HRM), содержащую сывороточный альбумин человека и ДМСО для эмбриональных и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток приматов.
Экспериментальные данные, приведенные ниже, описывают восстановление эмбриональных стволовых клеток, замороженных в Bambanker
TM HRM, по сравнению с 10 % ДМСО культуральной средой и медленным замораживанием, а также с витрификацией в обычной среде быстрым замораживанием. 3 дня клетки хранились в жидком азоте, после чего были разморожены по соответствующим протоколам и высеяны.
Каждая среда оценивалась по количеству положительных на щелочную фосфатазу колоний как показателей восстановления. При восстановлении из хранилища в жидком азоте показатели восстановления у среды Bambanker
TM HRM были в два раза выше, чем у среды для витрификации и в четыре раза выше, чем у среды с 10% ДМСО. При имитации транспортирования на сухом льду (клетки помещались на сухой лед на 24 часа после 3 дней в жидком азоте), показатель восстановления у среды Bambanker
TM HRM все еще оставался высоким, тогда как при витрификации он был значительно ниже.
Эти результаты показывают, что Bambanker
TM HRM обеспечивает эффективную криоконсервацию и транспортировку на сухом льду эмбриональных и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. Кроме того, поскольку Bambanker
TM HRM не содержит ксено-компонентов и химически определенного состава, она может быть полезна для других применений с такими клетками.