Руководство по вскрытию ампулы и восстановлению лиофизированного материала

1. По приемке храните ампулы при температуре 4±10°С.
   
   
2. Рекомендации по безопасности: Ампулы с опасными патогенами должны вскрываться в условиях соблюдения соответствующих мер предосторожности Экспертной Комиссии по Опасным Патогенам (смотрите «Условия поставки микробиологических патогенов: Безопасность») и в кабинете с вытяжной вентиляцией, спроектированном для защиты работников от вдыхания аэрозолей .
   
   
3. Идентифицируйте культуру по номеру внутри или снаружи ампулы. Считывать номер начинайте с круглого конца ампулы. Содержимое находится под вакуумом, поэтому должны быть приняты меры предосторожности при ее открытии.
   
   
4. Открытие ампулы с помощью зажима:
   • Аккуратно очистите ампулу снаружи с помощью дезинфектанта. Используя алмазный нож, алмазную ручку или пилку для стекла, сделайте глубокий надрез по окружности ампулы в центре пробки из хлопковой ваты.
   • Заверните ампулу в салфетку пропитанную дезинфектантом. Дополнительно оберните бумажным полотенцем, чтобы создать соответствующий защитный слой, предупреждающий порезы стеклом в момент сжатия ампулы. Убедитесь, что вы надели перчатки, защитные очки, халат, а также, что вы находитесь в безопасном кабинете.
   • Разломите ампулу в обертке в том месте, где был сделан надрез.
   • Аккуратно разверните ампулу, так как кусочки стекла могут быть в ткани и выкиньте ткань с наконечником от ампулы в контейнер для утилизации осколков. Когда ампула лопнет, воздух, фильтрованный пробкой, будет поступать внутрь. Пробка может быть загрязнена сухой культурой и должна быть удалена. Не беритесь непосредственно за пробку. Если она отделилась от наконечника ампулы, удалите ее щипцами.
   • Продолжайте с шага 6 и следуйте инструкции по восстановлению содержимого ампулы.
   
   
   
5. Открытие с помощью накаливания:
   • Аккуратно очистите ампулу снаружи с помощью дезинфектанта. Используя алмазный нож, алмазную ручку или пилку для стекла, сделайте глубокий надрез по окружности ампулы в центре пробки из хлопковой ваты.
   • Нагрейте тонкий стеклянный стержень или пипетку до тех пор, пока кончик не станет красным и не начнет плавиться, затем быстро и плотно прижмите горячий кончик к надрезу, чтобы вскрыть ампулу. Если появилась всего лишь маленькая трещинка, аккуратно постучите по этой точке, чтобы она пошла по кругу.
   • Если предпринятая попытка вскрыть ампулу была неудачной, повторите, используя новое накаленное стекло. Диаметр накаленного кончика не должен быть больше чем 2-3 мм. Если ампула не вскрывается, поместите ее в холод на несколько минут. Проверьте надрез, если необходимо сделайте надрез глубже и длиннее. Убедитесь, что используемый стеклянный стержень/пипетка достаточно накалена и что вы касаетесь надреза до того, как он/она остывает.
   • Когда ампула лопнет, воздух, фильтрованный пробкой, будет поступать внутрь. Пробка может быть загрязнена сухой культурой и должна быть удалена. Не беритесь за пробку, если она отделилась от наконечника ампулы, удалите ее щипцами.
   • Продолжайте с шага 6 и следуйте инструкции по восстановлению содержимого ампулы.
   
   
   
6. Восстановление:
   • Используя пипетку Пастера, добавьте примерно 0,5 мл питательной среды (обогащенной кровью, если необходимо) в ампулу и оставьте содержимое для регидратации на 5-10 минут. Перемешайте аккуратно содержимое, избегая пенообразования или образования аэрозолей.
   • Согласно требованиям к газовому составу (аэробность, анаэробность и т.д. - прим. переводчика), а также требованиям культивации, полученная на предыдущем этапе суспензия лиофилизата в питательном растворе должна быть субкультивирована на подходящей жидкой или твердой среде. Предпочтительно выбирать твердую среду, чтобы получить обособленные колонии и заметить воздушный контаминант, который мог быть занесен во время вскрытия ампулы.
   • Выбросьте ампулу в контейнер для утилизации осколков.

Видеоинструкция по вскрытию ампул с лиофилизированным материалом NCTC и NCTF (англ.)