Немодифицированные ddNTP для секвенирования и SNP генотипирования Nucleotides by Application / ... on DNA / Sequencing & SNP Genotyping - Unmodified ddNTPs for Sequencing & SNP Genotyping
|
 |
Дидеоксинуклеотид трифосфаты (ddNTP) не имеют 3'-ОР uheggs dNTP, что существенно для осуществляемого полимеразой удлинения цепи в ПЦР. Поэтому ddNTP используются в сочетании с модифицированной Taq полимеразой (например Сиквенсовой полимеразой JBS или Термосиквеназой™) как 3'-концевые терминаторы цепи в секвенировании методом Сэнгера [1] (Fig. 1) и генотипировании однонуклеотидного полиморфизма (SNP) методом добавления динуклеотида (SBE - single base pair extension )[2] (Fig. 2). Наши ddNTPs имеют очистку > 98 % (HPLC) и функционально тестированы в секвенировании методом обрыва цепи.
Figure 1: Секвенирование методом обрыва цепи (по Сэнгеру) [1] основано на линейной аплификации одноцепочечной матрицы ДНК с использованием 5'-флуоресцентно меченого праймера и модифицированной Taq полимеразы. Синтез комплементарной ДНК цепи начинается на спецефическом праймер-сайте и заканчивается при включении обрывающей цепь ddNTP, которая случайно включается вместо соответствующего dNTP. Используя четыре различных ddNTP в четырех различных реакционных емкостях, набор удлиненных праймеров останавливается на каждой A, C, G и Т. Когда эти фрагменты разделяются на подходящем гелевом матриксе, информация о последовартельности оказывается доступна в виде порядка полос (снизу вверх).
Figure 2: The Анализ методом добавления динуклеотида (SBE) является надежным методом для определения a priori известных локализаций однонуклеотидных полиморфизмов (SNPs)[2]. Он основан на удлинении праймера, связывающегося на один нуклеотид выше полиморфного локуса с помощью совпадения ddNTP. Последующая детекция встроенного ddNTP обеспечивается масс-спектрометрией выросшего праймера, тем самым выявляя нуклеотидное основание в этой позиции на матрице[3].
Литература
[1] Sanger et al. (1977) DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:5463.
[2] Syvänen et al. (1999) From gels to chips: Minisequencing primer extension for analysis of point mutations and single nucleotide polymorphisms. Hum. Mut. 13:10.
[3] Griffin et al. (2000) Single nucleotide polymorphism analysis by MALDI-TOF mass spectrometry. Trends Biotechnol. 18 (2):77.
| |||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||
|
Store at -20°C, short term (up to one week) exposure
to ambient temperature possible |
Aqueous solution of ultrapure, sequencing grade ddATP.
| ||||||||||||||||||
Datasheet
| |||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||
|
Store at -20°C, short term (up to one week) exposure
to ambient temperature possible |
Aqueous solution of ultrapure, sequencing grade ddCTP.
| ||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||
|
Store at -20°C, short term (up to one week) exposure
to ambient temperature possible |
Aqueous solution of ultrapure, sequencing grade ddGTP.
| ||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||
|
Store at -20°C, short term (up to one week) exposure
to ambient temperature possible |
Aqueous solution of ultrapure, sequencing grade ddTTP.
| ||||||||||||||||||
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
