Набор для выделения ДНК из бактерий PP-206 Очистка геномной ДНК из бактерий, в растворе
|
 |
Поскольку при выделении ДНК этим способом не используется хлороформ или фенол, работа с набором безопасна, а также не образуется вредных отходов. Комплект для выделения ДНК в обеспечивает наименьшее количество разрывов ДНК с возможностью выделять молекулы длиной до 150 kb.
Предполагаемое количество ДНК может изменяться от образца к образцу в зависимости от количества, качества и других характеристик используемого материала. Можно ожидать выход около 40 µg в одной реакции.
Другие наборы для выделения ДНК >>
| Название | Код | Цена | Количество | |
| L pack | PP-206L | по запросу | 500 preparations | |
| S pack | PP-206S | по запросу | 100 preparations | |
| Sample | PP-206XS | по запросу | 20 preparations |
| Документы |
|---|
 Datasheet
|
Также понадобится (не входит в поставку набора):
- Изопропанол (2-пропанол) >99%
- 96-99% этанол
- Бидистиллированная вода
- Пробирки 1,5 - 2 мл.
- Водяная баня или нагревательный блок на 37°C и 65°C.
Предварительная подготовка: Перед тем, как приступить к выделению ДНК, необходимо подготовить изопропанол (2-пропанол) >99%, добавить в отмывочный буфер 96-99% этанол, разбавить Лизоцим и РНКазу бидистиллированной водой в соответствии с приведенной далее информацией:
Состав комплекта
| PP-206XS (20 проб) |
PP-206S (100 проб) |
PP-206L (500 проб) |
|
| Жидкость для клеточного ресуспендирования | 6.4 мл | 32 мл | 160 мл |
| Лизоцим (100 мг/мл) | 5 мг (добавить 50 µl воды) | 25 мг (добавить 250 µl воды) | 5х 25 мг (добавить 250 µl воды в каждую пробирку) |
| РНКаза А (4 мг/мл) | 0.16 мг (добавить 40 µl воды) | 0.8 мг (добавить 200 µl воды) | 5х 0.8 мг (добавить 200 µl воды в каждую пробирку) |
| Раствор клеточного лизиса | 6.4 мл | 32 мл | 160 мл |
| Раствор белковой коагуляции | 2.2 мл | 11 мл | 55 мл |
| Отмывочный раствор | добавить 9.6 мл этанола до итогового количества 12 мл | добавить 48 мл этанола до итогового количества 60 мл | добавить в каждую бутыль 120 мл этанола до итогового количества 150 мл |
| Раствор гидратации ДНК | 2.2 мл | 11 мл | 55 мл |
Выделение ДНК из грам-положительных и грам-отрицательных бактерий
-
Лизис клеток:
- Поместите 1 мл культивируемых клеток в пробирку на 1.5 мл.
- Осадите клетки, центрифугируя при 15 000 g в течение 1 минуты и удалите супернатант.
- Ресуспендируйте клеточную массу в 300 мкл жидкости для клеточного ресуспендирования.
- При выделении ДНК из грам-положительных бактерий:
- Добавьте 2 µl раствора лизоцима и хорошо перемешайте переворачиванием.
- Инкубируйте в течение 60 минут (?) при 37°С, периодически переворачивая.
- Центрифугируйте в течение 1 минуты при 15 000 g и удалите супернатант.
- Ресуспендируйте осадок в 300 µl раствора для клеточного лизиса.
-
Удаление РНК:
- Добавьте 1.5 µl раствора РНКазы А и перемешайте переворачиванием.
- Инкубируйте в течение 15-30 минут при 37°С и охладите на льду в течение 1 минуты.
-
Осаждение белка:
- Влейте в пробирку 100 µl раствора белковой коагуляции и интенсивно перемешайте ее на вортексе 20-30 секунд.
- Осадите белок в центрифуге в течение 5 минут при 15 000 g
-
Осаждение ДНК:
- Влейте в новую пробирку на 1.5 мл 300 µl изопропанола >99% и перенесите в нее надосадочную жидкость из клеточного лизата .
- Переворачивайте пробирку в течение 1 минуты для перемешивания раствора.
- Центрифугируйте 1 минуту при 15 000 g. Должен образоваться небольшой, но заметный, белый осадок ДНК.
- Удалите надосадочную жидкость и осушите пробирку чистой фильтровальной бумагой.
- Внесите в пробирку 500 µl отмывочного буфера несколько раз перемешайте переворачиванием для растворения ДНК.
- Осаждайте ДНК 1 минуту при 15 000 g.
- Аккуратно удалите этанол и дайте остаткам испариться при комнатной температуре от 10 до 15 минут.
-
Гидратирование ДНК:
- Добавьте 50-100 µl раствора гидратации ДНК.
- Гидратируйте ДНК выдерживанием при 65°C в течение 60 минут.
- Храните ДНК при 4°C. На длительное хранение убирайте ДНК в морозильник -20°C или -80°C.
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
