Главная > Новости >
В результате экспериментов по изучению потенциальных мишеней для избирательного воздействия лекарственных средств на раковые клетки разработана методология получения однородных, способных к воспроизведению сфероидных конгломератов (3-D культура) опухолевых клеток, пригодных для функционального скрининга siRNA (Lullaby, OZ Biosciences) .
В исследовании применена одна из стратегий функциональной геномики, а именно подавление экспрессии гена за счет механизма РНК-интерференции. В качестве объекта исследования использована культура сфероидов раковых клеток, так как данный тип, в отличие от традиционной монослойной 2-D культуры, представляет собой наиболее точную модель раковой опухоли in vivo и демонстрирует ряд свойств, признаков и характеристик, присущих большим опухолям человека. Работа с 3-D культурами злокачественных клеток нацелена на развитие индивидуальной, направленной и максимально эффективной противоопухолевой терапии с минимизацией риска побочных явлений. В результате исследований установлена функциональная зависимость для линии клеток рака молочной железы BT474. Работа может быть продолжена для получения доказательств с использованием гистохимических методов
В настоящее время таргетная терапия, то есть подход, когда для конкретного злокачественного новообразования применяются определенные противоопухолевые препараты, выбор которых основывается на генетических данных пациента, является приоритетным научным направлением. Достижения в данной области смогут позволить перейти от доклинических испытаний к испытаниям на людях и решить серьезную насущную проблему высокой токсичности и низкой эффективности лекарственных средств, используемых в лечении онкологических заболеваний.
Рисунок 1 - Оптимизация клеточных линий для выращивания в 3-D культуре.
А. Клеточные линии рака молочной железы BT474 и MCF10DCIS.com на 7-ой день культивирования.
Изображение сделано с использованием инвертированного микроскопа. Масштабная линейка - 100 мкм.
В. Сфероиды линий BT474 и MCF10DCIS.com на 28-ой день культивирования при малом (слева) и большом увеличении (справа).
Фиксация в 3.8% формальдегиде, окраска гематоксилином и эозином (Н&Е). Масштабная линейка -100 мкм и 33 мкм, соответственно.
Рисунок 2 – Схема обобщенных результатов исследования функциональной зависимости генов в культуре сфероидов раковых клеток при использовании обратного протокола трансфекции.
Источник:
Morrison, E., Wai, P., Leonidou, A., Bland, P., Khalique, S., Farnie, G., et al. Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures. J. Vis. Exp. (118), e54738, doi:10.3791/54738 (2016).
Использование функционального скрининга для выявления потенциальных мишеней для новых лекарственных средств в культуре сфероидов раковых клеток
В результате экспериментов по изучению потенциальных мишеней для избирательного воздействия лекарственных средств на раковые клетки разработана методология получения однородных, способных к воспроизведению сфероидных конгломератов (3-D культура) опухолевых клеток, пригодных для функционального скрининга siRNA (Lullaby, OZ Biosciences) .
В исследовании применена одна из стратегий функциональной геномики, а именно подавление экспрессии гена за счет механизма РНК-интерференции. В качестве объекта исследования использована культура сфероидов раковых клеток, так как данный тип, в отличие от традиционной монослойной 2-D культуры, представляет собой наиболее точную модель раковой опухоли in vivo и демонстрирует ряд свойств, признаков и характеристик, присущих большим опухолям человека. Работа с 3-D культурами злокачественных клеток нацелена на развитие индивидуальной, направленной и максимально эффективной противоопухолевой терапии с минимизацией риска побочных явлений. В результате исследований установлена функциональная зависимость для линии клеток рака молочной железы BT474. Работа может быть продолжена для получения доказательств с использованием гистохимических методов
В настоящее время таргетная терапия, то есть подход, когда для конкретного злокачественного новообразования применяются определенные противоопухолевые препараты, выбор которых основывается на генетических данных пациента, является приоритетным научным направлением. Достижения в данной области смогут позволить перейти от доклинических испытаний к испытаниям на людях и решить серьезную насущную проблему высокой токсичности и низкой эффективности лекарственных средств, используемых в лечении онкологических заболеваний.
Рисунок 1 - Оптимизация клеточных линий для выращивания в 3-D культуре.
А. Клеточные линии рака молочной железы BT474 и MCF10DCIS.com на 7-ой день культивирования.
Изображение сделано с использованием инвертированного микроскопа. Масштабная линейка - 100 мкм.
В. Сфероиды линий BT474 и MCF10DCIS.com на 28-ой день культивирования при малом (слева) и большом увеличении (справа).
Фиксация в 3.8% формальдегиде, окраска гематоксилином и эозином (Н&Е). Масштабная линейка -100 мкм и 33 мкм, соответственно.
Рисунок 2 – Схема обобщенных результатов исследования функциональной зависимости генов в культуре сфероидов раковых клеток при использовании обратного протокола трансфекции.
Источник:
Morrison, E., Wai, P., Leonidou, A., Bland, P., Khalique, S., Farnie, G., et al. Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures. J. Vis. Exp. (118), e54738, doi:10.3791/54738 (2016).
