Магнетофекция

Магнетофекция - новый, простой и очень эффективный метод трансфекции.

Вдохновленный проверенной и признанной магнитной технологией таргетинга лекарственных средств, этот оригинальный метод - революция для трансфекции и инфекции. В сущности идея состояла в том, чтобы объединить преимущества популярных биохимических (катионные липиды или полимеры) и физических (электропорация, геная пушка) методов трансфекции в одной системе, одновременно исключая их неудобства (низкая эффективность, токсичность, трудность применения). Это - уникальная технология, подходящая для вирусных и не вирусных методов доставки генов.

ПРИНЦИП МЕТОДА

Принцип магнетофекции заключается в связывании нуклеиновых кислот, реактивов для трансфекции или вирусов с особыми магнитными наночастицами. Получающиеся молекулярные комплексы  концентрируются и транспортируются в клетки под действием соответствующего магнитного поля. Таким образом эксплуатация магнитной силы, действующей на генные векторы, делает возможной очень быструю концентрацию всей добавленной дозы вектора на клетках, так, чтобы 100% клеток вошли в контакт со значительной дозой вектора, и стимулирует клеточный захват.

Как это работает?

Магнитные наночастицы изготавливают из оксида железного, который полностью биоразлагаем, покрыт особыми запатентованными катионными молекулами, отличающимися в зависимости от сферы применения. Их связывание с генными векторами (ДНК, миРНК, ODN, вирусы, и т.д.) достигается за счет индуцируемой солями коллоидной агрегации и электростатического взаимодействия. Затем магнитные частицы концентрируют на клетках под действием внешнего магнитного поля, сгенерированного специальной магнитной пластиной. Клеточный захват генетического материала происходт за счет эндоцитоза и пиноцитоза, двух естественных биологических процессов. Следовательно, мембранная архитектура и структура остаются интактными в отличие от других физических методов трансфекции, повреждающих, создающих отверстие или действующих электрошоком на клеточные мембраны. Нуклеиновые кислоты высвобождаются в цитоплазму различными механизмами в зависимости от используемого состава:

1.Эффект протонной губки, вызванный катионными полимерами на поверхности на наночастиц, который вызывает осмотическое набухание эндосом, разрушение эндосомальной мембраны и выход ДНК внутрь клетки.

2.Дестабилизация эндосомы катионными липидами на поверхности частиц, высвобождающих нуклеиновую кислоту за счет флип-флопа отрицательно заряженных липидов и нейтрализации заряда.

3.Стандартный механизм введения нуклеиновой кислоты вирусом.

БИОРАСПРЕДЕЛЕНИЕ МАГНИТНЫХ НАНОЧАСТИЦ

Биоразлагаемые катионные магнитные наночастицы не токсичны в рекомендуемых и даже более высоких дозах. Генные векторы / магнитные комплексы наночастиц попадают в клетки за 10-15 минут т.е. намного быстрее, чем при каком-либо другом методе трансфекции. После 24, 48 или 72 часов большинство частиц локализовано в цитоплазме, в вакуолях (окруженные мембраной структуры в клетках), и изредка в ядре. Кроме того, магнитные наночастицы не влияют на функцию клетки.

КАКОВА ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ?

Магнетофекция - единственная гибкая и универсальная технология, адаптированная ко всем типам нуклеиновых кислот (ДНК, siRNA, дцРНК, шРНК, мРНК, ODN...), невирусные системы трансфекции (реактивы для трансфекции) и вирусы. В соответствии с этим, были разработаны несколько оптимизированных реактивов:

Набор для трансфекции LipoMag: для всех нуклеиновых кислот, ассоциации CombiMag + реактивы DreamFect Gold

Набор для трансфекции MagnetoFectamine для всех нуклеиновых кислот, комбинации CombiMag + липофектамин 2000

PolyMag / PolyMag Neo: реактивы для трансфекции любыми нуклеиновыми кислотами

Реактив для трансфекции NeuroMag для трансфекции нейронов

Реактив для трансфекции CombiMag для улучшения эффективности реактивов трансфекции (см. магнетофектамин),

Реактив для трансфекции SilenceMag для приложений siRNA

Реактив для трансдукции ViroMag для улучшения эффективности вирусной трансдукции

Реактив для трансдукции ViroMag R/L для трансдукции лентивирусов и ретровирусов

Реактив для трансдукции AdenoMag для аденовирусов и AAV

Наборы Mag4C-LV / Mag4C-AD: для сбора и концентрации лентивирусов и аденовирусов

Реактив для трансфекции FluoMag: флуоресцентные реактивы для магнетофекции

Набор для трансфекции SelfMag: для создания Вашей собственной магнитной системы доставки

Магнетофекция была успешно проверена на широком диапазоне клеточных линий, трудно трансфецируемых и первичных клеток. Она отлично подходит для не делящихся или медленно делящихся клеток, что означает, что генетические материалы могут попасть в ядро без клеточного деления. Мы показали, что объединение магнитных наночастиц с генными векторами любого вида приводит к значительному увеличению захвата этих векторов и высокой эффективности трансфекции. Магнетофекция - единственная технология, подходящая и для вирусов, и для невирусных вариантов доставки нуклеиновой кислоты.

- При не вирусной доставке нуклеиновой кислоты метод хорошо подходит для первичных и трудно трансфецируемых адгезионных клеток.

- Для вирусных приложений метод идеален для любых клеток включая первичные клетки (прикрепленные и суспензионны).

Свяжитесь с нами для получения списка клеток, на которых метод был успешно проверен.

КАК ИСПОЛЬЗОВАТЬ РЕАКТИВЫ ДЛЯ МАГНЕТОФЕКЦИИ?

Протокол - очень простая процедура:

1. Разбавьте нуклеиновые кислоты или векторы в бессывороточной среде или буфере и добавбте реактив Magnetofection™.

2. Проинкубируйте 20-30 минут.

3. Добавьте комплексы непосредственно к клеткам.

4. Приложите магнитное поле (поместите чашку Петри на магнитную пластину).

5. Инкубируйте 5-20 минут, удалить магнитную пластину и культивируйте клетки до анализа.

НУЖНО ЛИ МНЕ СПЕЦИАЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ?

Единственное требование для магнетофекции - магнитная пластина, специально предназначенная для этого метода. Магнитная пластина - одноразовая покупка, полностью пригодная для многократного использования. Таким образом, Вам не нужно дорогое оборудование в отличие от других методов, таких как генная пушка или электропорация. Требуемое магнитное поле производится специальными магнитами. Доступны три вид магнитных пластины: супер магнитная пластина, магнитная пластина с 96 индивидуальными магнитами и мега магнитная пластина. Их дизайн позволяет производить разнородное магнитное поле, которое намагничивает наночастицы в растворе, формирует очень сильный градиент для привлечения наночастиц и покрывает всю поверхность пластины. Пластину можно мыть 70% этанолом и использовать в инкубаторах или роботах. 

Магнитные пластины для трансфекции

Технологии и методы

Трансфекция